[发明专利]用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法

权利要求书

1.用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，所述肠杆菌SY-8(Enterobacter cloacae SY-8)已保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2011年02月28日，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.4622；

所述用阴沟肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法包括以下步骤：

1)取液氮保藏的菌株阴沟肠杆菌SY-8，接入装有LB培养基的三角瓶中振荡培养，使菌株复苏；

2)将复苏后的菌液转接入发酵罐中的LB培养基中发酵培养，并加入诱导剂，诱导培养后，即可获得发酵液；

3)将发酵液离心，获得菌体，将菌体重悬于磷酸缓冲液制得含菌体菌悬液，再将菌悬液破碎，然后通过离心去除细胞碎片，收集上清液，即为铁型超氧化物歧化酶粗酶液，再将铁型超氧化物歧化酶粗酶液经硫酸氨分级沉淀，得到的沉淀物再用磷酸缓冲液重悬后用丙酮沉淀，即可得到纯化的铁型超氧化物歧化酶。

2.如权利要求1所述的用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述菌株与LB培养基的体积比为1∶10～200，最好为1∶100。

3.如权利要求2所述的用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，所述LB培养基的组成为每升LB培养基中含胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，pH＝7.2。

4.如权利要求1所述的用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述振荡培养的条件为：温度为28～37℃，最好为30℃，置于150～240r/min，最好为200r/min的摇床中振荡培养。

5.如权利要求1所述的用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，在步骤2)中，所述复苏后的菌液的体积百分比用量为LB培养基的1％～10％。

6.如权利要求1所述的用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，在步骤2)中，所述发酵培养的温度为28～37℃，发酵培养的时间为16～24h。

7.如权利要求1所述的用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，在步骤2)中，所述诱导剂采用Fe³⁺或H₂O₂，所述Fe³⁺的浓度为100～500mg/L，所述H₂O₂的体积比为1％～5％；所述诱导培养的时间为24～48h。

8.如权利要求1所述的用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，在步骤3)中，所制得的含菌体菌悬液中含有菌体10％。

9.如权利要求1所述的用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，在步骤3)中，所述将菌悬液破碎是通过高压细胞破碎方法破碎。

10.如权利要求1所述的用肠杆菌SY-8发酵生产铁型超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，在步骤3)中，所述硫酸氨分级沉淀中硫酸氨的浓度为35％～80％；所述丙酮沉淀中丙酮的用量按体积百分比为磷酸缓冲液重悬液的30％～50％，最好为36％。