[发明专利]用于检测猪瘟病毒野毒株的引物对、探针、以及试剂盒

权利要求书

1.一种引物对，其中一条引物包含SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列，另一条引物包含SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列。

2.一种探针，其包含SEQ ID NO：16所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的探针，其为自身淬灭探针，例如其5’端标记有荧光发射基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的探针，其中，所述荧光发射基团选自FAM、VIC、JOE、和HEX；所述荧光淬灭具体选自TAMRA、BHQ、和MGB。

5.一种组合物，其含有权利要求1所述的引物对和/或者权利要求2-4中任一项所述的探针。

6.一种试剂盒，其包含权利要求1所述的引物对和权利要求2-4中任一项所述的探针。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其还包含RT-PCR反应缓冲液、反转录酶和Taq酶；具体地，所述反转录酶为高效反转录酶，所述Taq酶为热启动Taq酶。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述引物对溶于RT-PCR反应缓冲液，其浓度为10pmoL/μL。

9.根据权利要求6所述的试剂盒，其还包含RNA提取试剂。

10.根据权利要求6所述的试剂盒，其还包含阳性对照和阴性对照，其中，所述阳性对照为猪瘟石门标准毒株，经过灭活后得到；所述阴性对照为猪瘟疫苗株，经灭活后得到。

11.一种检测猪瘟病毒野毒株的方法，包括使用权利要求1所述的引物对、权利要求2-4中任一项所述的探针、权利要求5所述的组合物、或者权利要求6-10中任一项所述的试剂盒的步骤。

12.根据权利要求11所述的方法，包括下述步骤：

1)病毒RNA的提取；

2)进行FQ-PCR反应：设被检样品RNA、阴性对照和阳性对照总体积为N，则反应体系配制如下：

在荧光PCR仪上进行以下反应：42℃5min，95℃10s；95℃5s，60℃35s，在每个循环第二步即60℃35s收集荧光信号，共40个循环；

3)判断待检样品：

阳性对照Ct值≤30并出现特定的扩增曲线，阴性对照无Ct值并且无特定扩增曲线，实验结果成立；

无特异性扩增曲线为阴性结果；

有特异性扩增曲线的情况下，样本Ct值≤30判断为阳性，样本Ct值满足30＜Ct＜37时需要进行重复试验，重复试验结果若Ct＜37判定样品为阳性，否则为阴性。

13.权利要求1所述的引物对、权利要求2-4中任一项所述的探针、权利要求5所述的组合物、或者权利要求6-10中任一项所述的试剂盒在制备检测测猪瘟病毒野毒株的试剂中的用途。