[发明专利]一种快速检测外源基因对羊毛作用的方法

说明书

技术领域

本发明涉及转基因技术领域，具体地说是一种快速检测外源基因表达及外源基因对羊毛作用的方法。

背景技术

目前，对大动物验证外源基因产生的影响一般采用小鼠模型，但由于物种间对外源基因所起的作用存在很大的差异，所以很难真实体现外源基因对目标动物的实际影响。另外，未在动物个体水平上做功能验证之前，开展转基因动物生产具有一定的盲目性和表型的不确定性。以改善羊毛生长和品质进行转基因绵羊的研究，在开展转基因绵羊的生产前就非常有必要确定外源基因是否正确表达、外源基因对羊毛生长以及毛囊发育的作用，从而克服生产转基因绵羊的盲目性。家畜转基因动物制作的生产成本高，繁殖周期长，设计技术环节繁琐等给转基因绵羊的制作带来巨大的障碍。因而要想通过转基因动物的方式检测外源基因对羊毛生长和毛囊发育的作用，具有时间长，耗资大、操作受限等诸多不利因素。即使在获得转基因个体的情况下，由于转基因个体间受环境、饲料等诸多因素的影响，造成个体基础数据之间的变异较大，依然不能准确体现外源基因对羊毛的作用(对羊毛生长的作用和毛囊发育的作用)。

有鉴于上述现有的用小鼠模型做实验或用转基因动物进行检测外源基因表达及其对羊毛作用的技术存在的缺陷，本发明人基于从事此类产品设计制造多年丰富的实务经验及专业知识，并配合学理的运用，积极加以研究创新，以期创设一种快速检测外源基因对羊毛作用的方法，能够改进一般现有技术存在的问题。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种快速检测外源基因对羊毛作用的方法。本发明方法检测周期短，能准确体现外源基因是否在皮肤毛囊中正确表达和外源基因对羊毛的作用。

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下技术方案：

一种快速检测外源基因对羊毛作用的方法，将外源基因用活体转染试剂包裹注射到绵羊真皮层作为实验区，在该绵羊的不同部位注射稀释外源基因的溶质作为对照区，通过实验区和对照区的对比检测外源基因表达及其对羊毛作用。

进一步，所述外源基因和溶质通过无针注射器注射。

进一步，所述外源基因和溶质的注射方式为将注射部位的皮肤对折进行注射。

进一步，所述外源基因和溶质的注射深度为3～5毫米。

进一步，所述实验区和对照区位于绵羊背部对称的两侧。

进一步，所述外源基因以pDsRed2-1为载体骨架，从pIRES-EGFP质粒上获得CMV启动子，插入到pDsRed2-1多克隆位点中，驱动红色荧光蛋白基因的表达；然后根据GenBank中的序列设计引物，并引入酶切位点，从绵羊基因组中克隆得到IGFI、KAP6.1基因的序列，然后构建在KAP6.1启动子驱动下表达IGFI的真核表达载体。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明快速检测外源基因对羊毛作用的方法能在同一个体、同一时间、同一代谢水平上检测外源基因对羊毛的作用。具体的检测内容及检测方法根据需要均可在现有技术中找到。一般包括羊毛的生长速度、密度、品质及毛囊发育(静止期毛囊与生长期毛囊相互转化)的作用，以及基因表达等。因为只有在外源基因正确表达的前提下才对羊毛有作用，各项检测才有意义，增强了转基因绵羊生产的目的性。避免了不同个体间的差异，缩短了功能验证的周期。即使在获得转基因个体的情况下，由于转基因个体间受环境、饲料等诸多因素的影响，造成个体基础数据之间的变异较大。在保证检测质量的前提下大大降低了难度，减少了成本。

附图说明

图1为本发明的快速检测外源基因对羊毛作用的方法的对照区和实验区的选取部位图片；

图2为本发明的快速检测外源基因对羊毛作用的方法的对照区的放大图片；

图3为本发明的快速检测外源基因对羊毛作用的方法的在对照区和实验区进行注射的图片；

图4为本发明的快速检测外源基因对羊毛作用的方法的在对照区和实验区进行皮肤截取的图片；

图5为本发明的快速检测外源基因对羊毛作用的方法中用多聚甲醛固定后组织块的图片；

图6为本发明的快速检测外源基因对羊毛作用的方法中注射后的对照区在显微镜下毛囊观察的图片；

图7为本发明的快速检测外源基因对羊毛作用的方法中注射后的实验区在显微镜下毛囊观察的图片；

图8为本发明的快速检测外源基因对羊毛作用的方法中的对照区基因表达检测的图片；

图9为本发明的快速检测外源基因对羊毛作用的方法中的实验区基因表达检测的图片。

具体实施方式