[发明专利]磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸修饰的纳米紫杉醇脂质体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种治疗肿瘤的药物，具体涉及一种磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-叶酸修饰的纳米紫杉醇脂质体及其制备方法；本发明还涉及所述脂质体在制备治疗卵巢癌药物方面的应用。

背景技术

细胞毒性药物在对肿瘤进行化疗时，常因药物不能在肿瘤部位达到有效浓度而导致化疗失败，同时也会增加毒副作用。

卵巢癌是妇科肿瘤的元凶，死亡率很高。因为卵巢癌＞90％为叶酸受体阳性表达，表达量高，而正常卵巢上皮叶酸受体阴性，在叶酸受体(叶酸)介导的卵巢癌靶向治疗中，将药物与叶酸结合，利用叶酸受体在肿瘤细胞的过度表达，以叶酸受体为作用靶点，即可将药物主动靶向肿瘤细胞，从而提高药物在肿瘤组织分布，达到靶向诊断、治疗的目的。

紫杉醇是临床常用的有效治疗卵巢癌的药物。纳米技术是药物传输的良好工具和载体：方法新颖，装载药物量大，体积小易于进入细胞；在机体内可被生物降解从而不造成对机体毒害。因此叶酸偶联纳米紫杉醇脂质体是对卵巢癌非常有效的靶向治疗药物。

以下文献报道了不同的叶酸-紫杉醇脂质体及其制备方法：

1、Yuan H，Miao J，Du YZ，et al.Cellular uptake of solid lipid nanoparticles and cytotoxicity of encapsulated paclitaxel in A549cancer cells.Int J Pharm.2008Feb 4；348(1-2)：137-45Yuan中，分别制备了聚乙二醇修饰的紫杉醇脂质体和叶酸偶联紫杉醇脂质体。

但是该方法制备的脂质体有如下缺点：

一是制备脂质体所用的原料仅有硬脂酸，缺乏胆固醇等对脂质体膜起稳定作用的物质，造成脂质体膜的流动性较强，包封的药物容易泄漏；

二是叶酸偶联紫杉醇脂质体仅将叶酸与脂肪酸相连接，中间没有聚乙二醇连接，制成的脂质体在体内代谢过快，影响药效，而不具备长循环脂质体延缓药物代谢，增加体内循环时间等优越性；

三是制成的两种脂质体粒径均较大，分别为374.3±54.9nm，369.3±49.3nm，所以药效很低：对A549细胞(肺腺癌细胞)的IC₅₀分别为1.86±0.13μg/ml，0.21±0.02μg/ml。远大于本发明制备的叶酸偶联纳米紫杉醇的粒径140.5±10.3nm，及对SKOV 3细胞的IC50 0.027±0.002μg/ml，药效远低于本发明的药物。

2、A folatere ceptor-targeted liposomal formulation for paclitaxel Jun Wu，Qing Liu，Robert J.Lee.A Folate receptor-targeted liposomal formulation for paclitaxe l[J].International Journal of Pharmaceutics.316(2006)：148 153。其制备中先将DSPE-PEG-FA(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-叶酸)放入脂材中，然后用薄膜分散-挤压法制备叶酸偶联纳米紫杉醇脂质体。在容器中分别加入紫杉醇、磷脂、胆固醇和无水乙醇，溶解后除去乙醇，当容器内容物呈薄膜状附着于容器壁时，加入水并进行超声波震荡，然后将所得混合物用挤压器通过0.1um的微孔滤膜，即得紫杉醇纳米脂质体混悬液；

该方法制备的脂质体有如下缺点：

一是所得到的脂质体连接叶酸前后的粒径变化较大，加靶前紫杉醇脂质体粒径在60nm左右，加靶后增大约30nm左右。原因在于制备中DSPE-PEG-FA(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-叶酸)的FA侧(即亲水性的靶头叶酸端)在制备中有可能隐藏于脂质体内部(位于双层磷脂之间的水相中)，可能会减弱叶酸的靶向能力；

二是药效也较低，对KB细胞(人口腔鳞癌细胞)的IC₅₀为0.048um；而本发明制备的药物与文献1的包封率相近，对SKOV3细胞的IC50仅为0.036nm。

三是磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-叶酸在脂质体中含量较高，与磷脂的摩尔比达0.5％，由于其中的叶酸可与人体内的叶酸受体结合，而导致用药者正常叶酸摄入的不足，引起疾病，如巨幼细胞性贫血，周围神经病。

3、A Folate Receptor Targeted Lipid Nanoparticle Formulation for a Lipophilic Paclitaxel Prodrug