[发明专利]酵母展示脂肪酶催化合成十二烯基琥珀酸淀粉酯的方法无效
| 申请号： | 201110110430.5 | 申请日： | 2011-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN102212586A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 阮晖;王睿之;古再丽努尔;徐娟;周陈伟;林吉恒;何国庆 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12P19/04 | 分类号： | C12P19/04;C12N15/63;C12N1/19;C12N9/20;C12R1/84 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酵母 展示 脂肪酶 催化 合成 十二 琥珀酸 淀粉 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种酵母表面展示脂肪酶催化合成十二烯基琥珀酸淀粉酯的方法，包括：
将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入体积浓度10～20％的十二烯基琥珀酸酐乙醇溶液和酵母表面展示脂肪酶，在55～65℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得十二烯基琥珀酸淀粉酯；
所述的酵母表面展示脂肪酶通过如下方法制备：
将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母表面展示脂肪酶；
所述的重组质粒由原始载体pPIC9K和依次插入原始载体pPIC9K中MFα1信号肽下游的脂肪酶基因和毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因组成。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：以重量份计，水100～120份、谷物淀粉32～35份、十二烯基琥珀酸酐乙醇溶液1～1.2份、酵母表面展示脂肪酶1～2份。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的搅拌速率为200～300转/分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物印迹中采用的配体为油酸。
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