[发明专利]用骨髓组织块分离及培养禽类骨髓间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种利用骨髓组织块分离及培养禽类骨髓间充质干细胞的方法，其特征在于，将禽类骨髓碎块悬浮于胎牛血清中，然后将该血清悬浮液移至培养皿中，倾斜放置一段时间，去除血清后加入完全培养液贴壁培养，获得原代培养细胞；经胰蛋白酶消化后进行传代，然后以完全培养液培养，传代2-4次后获得禽类骨髓间充质干细胞，在体外培养体系中继代扩增培养；

其中，所述完全培养液为含有10％胎牛血清的低糖DMEM培养液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述倾斜放置是培养皿与水平面呈30-60度角。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，倾斜放置放置的时间为40-60分钟。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，去除血清后加入完全培养液贴壁培养的时间为3-6天。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，原代培养细胞经胰蛋白酶消化后，以1∶2-3的比例传代。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，禽类骨髓来自于禽类的股骨和/或肱骨。

7.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述禽类骨髓碎块为1～2mm³。

8.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，贴壁培养的密度为0.5～1骨髓组织碎块/cm²。

9.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，继代扩增培养时细胞接种密度为1×10⁵～1×10⁶个细胞/cm²。