[发明专利]黄花蝴蝶草的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组织培养方法，具体地是涉及一种采用组织培养技术对黄花蝴蝶草进行离体快速繁殖的方法。

背景技术

植物组织培养是指用植物的任何器官、组织或细胞，在人工控制条件下进行无菌培养生长发育的过程。该技术取材少，培养植物材料成本低，生长周期短，管理方便。利用植物组织培养这种快速繁殖技术，能在短时间内繁衍出大量保持母本生物特性和遗传性状的植株。据了解，我国快速繁殖的植物己有近千种。通常使用的基本培养基有数种，如MS，B5，White，N6等。在组织培养中，植物外植体要在植物生长物质的作用下，经过诱导脱分化、恢复细胞分裂的能力、影响再分化、促进器官形成等过程。植物外植体繁殖系数的大小，直接影响着生产后代植株的数量和质量。

植物组织培养的基本过程为：利用植物体离体的器官、组织或细胞，（如根、茎、叶、花、果实、种子、胚、胚珠、子房、花药、花粉以及贮藏器官的薄壁组织、维管束组织等）在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等条件下，诱导出愈伤组织再分化形成不定芽，或者直接由植物离体组织或器官直接分化出丛生芽，然后诱导生根，最后形成完整的植株。再生植株经炼苗后移栽，最终形成商品植株。

黄花蝴蝶草（Torenia flava Buch-Ham. Ex Benth）别名泡卜儿，为玄参科一年生草本。国内分布于我国广东、广西、台湾等省区，国外分布于印度、缅甸、越南、老挝、柬埔寨、马来西亚及印度尼西亚。黄花蝴蝶草全草可入药，有利水消肿和清肝明目之效，主要用于治水肿和合成它类药物。同时由于其花色明艳，还经常用于美化花坛或用于盆栽。近年来由于医疗保健行业的发展以及人们对生活环境需求的不断提高，人们对其需求量也不断的增大。

黄花蝴蝶草的繁殖方法主要靠扦插繁殖，但自然繁殖存在着繁殖系数低，在很大程度上受到季节的限制。如能通过组织培养可以达到短时间内快速繁殖的目的，提高产量，并且可以克服季节对繁殖的影响。但是，目前国内以黄花蝴蝶草为实验材料进行的研究还处于起始阶段，只对离体培养条件进行了初步的研究。黄花蝴蝶草植株再生虽有报道，但不是很多。

发明内容

本发明的目的在于提供一种黄花蝴蝶草的快速繁殖方法，它能够明显提高黄花蝴蝶草的无性繁殖系数，繁殖速度快而且操作简便，实现黄花蝴蝶草的规模化微繁殖，是获得大量优质种苗的有效途径。

为了达到上述目的，本发明所述的一种黄花蝴蝶草的快速繁殖方法，包括如下步骤：

（1）外植体消毒：将黄花蝴蝶草顶芽或侧芽置于65～75%乙醇中浸泡20～60s（表示“秒”，下同），0.1%升汞中灭菌4～12min（表示“分钟”，下同），再用无菌水冲洗3～6次；

（2）无菌苗的获得：将消毒后的黄花蝴蝶草顶芽或侧芽接种到MS培养基中培养15～30天获得无菌苗，培养条件为温度25±2 0℃，光照强度1500Lux，光照时间12h·d-1 （表示“小时/天”，下同）；

（3）诱导丛生芽发生：将剪成5mm×5mm大小的无菌苗叶片置于配方为MS+1.0～2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤（简称6-BA）+0～1.5mg/L萘乙酸（简称NAA），MS+0.01～0.1 mg/L 吡效隆（简称4-PU）或噻苯隆（简称TDZ）的培养基上培养14～21天获得丛生芽（高度一般为2cm），培养条件同步骤（2）；

（4）诱导生根：将步骤（2）所得到的无菌苗切取高0.5～1.0cm左右的单芽，在1～1/4MS、1/3MS+0～0.1mg/L吲哚丁酸（简称IBA）或NAA，的培养基上培养7～14天得到再生植株，培养条件同步骤（2）；

（5）再生植株移栽：将步骤（4）获得的再生植株经炼苗后，移栽入蛭石或者花卉土中，用自来水或者1/4MS培养液浇灌。

上述方法中，在步骤（3）中，培养基的优选方案是MS+1.0～2.0mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA，MS+0.01～0.1 mg/L 4-PU或TDZ，更优选的是MS+2.0mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA。步骤（4）中培养基的优选配方是采用1/2～1/4MS和1/3MS+0.05～0.1mg/L IBA或NAA，更优选的是1/3MS+0.05mg/L NAA。

本发明具有如下的优点和效果：

1、经实验证明，在本发明所述方法的步骤（3）中不定芽的诱导率最高可达100%，每个外植体都可以分化出多个不定芽，其中以2.0mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA的培养基中的不定芽最多，平均每个外植体的不定芽大于20个。