[发明专利]一种林可霉素的分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种林可霉素的分离方法。

背景技术

林可霉素(Lincomycin)是一种林可胺类碱性抗生素，易溶于水和甲醇，临床上用其盐酸盐，主要用于治疗革兰氏阳性菌起的感染。用林肯链霉菌(Streptomyces lincolnensis)发酵生产林可霉素的过程中除产生林可霉素外，也产生林可霉素B组分等其他结构类似物。林可霉素B组分是一种有毒成分，需要除去，否则会影响产品质量，尤其是在加工林可霉素衍生物时对B组分含量的控制更为严格。

传统工艺一般采用溶媒萃取法从发酵液中提取林可霉素。其中，丁醇萃取法的缺点是溶剂消耗大、操作条件和环境差，结晶成品的B组分含量高；使用高碳醇，如辛醇作为萃取剂时，可以在一定程度上降低B组分的含量，但气味难闻，操作复杂；CN 101348508A专利文献中公开了一种用树脂从发酵液中提取林可霉素的方法，该方法省去了萃取步骤，但缺点是B组分的含量仍然较高(0.7％～1.3％)。鉴于现有林可霉素分离方法存在上述缺陷，该现状亟待解决。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服了现有技术中林可霉素的分离方法溶剂消耗大或操作复杂，并且均存在获得产品中林可霉素B组分含量较高的缺陷，提供了一种溶剂消耗适中、操作简便，且产品林可霉素纯度可达98％以上，而林可霉素B组分含量0.5％以下的林可霉素的分离方法。

本发明的林可霉素的分离方法包括如下步骤：将含林可霉素发酵液酸化后过滤，然后调碱性后再次过滤取滤液，之后上样聚苯乙烯-二乙烯苯反相吸附树脂柱，先用与上样液同pH的碱性水溶液洗脱除杂，再用正丁醇洗脱林可霉素，收集林可霉素正丁醇溶液进行浓缩、酸化并结晶，然后再用丙酮重结晶，即可。

本发明中，所述的含林可霉素发酵液为本领域常规制备林可霉素的微生物菌发酵液，一般由林肯链霉菌Streptomyces lincolnensis经过本领域常规方法发酵培养获得。所述的林肯链霉菌具体菌种没有特殊限定，常规能够生产林可霉素的菌种均可使用，如林肯链霉菌Streptomyces lincolnensis NRRL2936、林肯链霉菌Streptomyces lincolnensis CPCC 280065(中国药用微生物菌种保藏管理中心可售)、林肯链霉菌Streptomyces lincolnensis CPCC 240859(中国药用微生物菌种保藏管理中心可售)等。其中，所述的林肯链霉菌经培养发酵获得含林可霉素发酵液具体菌种不受限定是因为林可霉素是林肯链霉菌的次级代谢产物，不同的具体菌株虽然在林可霉素的产量、杂质的比例上有所不同，但发酵液的主要成分相对固定，因此不同具体菌种林肯链霉菌制备的发酵液均适用本发明方法。

本发明中，所述的含林可霉素发酵液酸化后过滤，然后调碱性后再次过滤取滤液为本领域常规分离林可霉素处理发酵液的常规预处理操作，其中，酸化是为了络合钙离子等金属离子以沉淀杂质蛋白并利于过滤，调碱性后再次过滤是为了沉淀除去碱性不溶杂质进一步澄清滤液，均属于常规现有操作。其中，所述的酸化较佳的为草酸调pH 2-4，更佳为草酸调pH 3；所述的调碱性较佳的为氢氧化钠调pH 9-11，更佳的为氢氧化钠调pH 10；所述的过滤较佳的为板框过滤。

本发明中，所述的聚苯乙烯-二乙烯苯反相吸附树脂(PS-DVB反相吸附树脂)为本领域常规使用的聚苯乙烯-二乙烯苯反相吸附树脂，较佳的型号为NM PS100或微球1号，更佳的为NM PS100。其中，所述的PS-DVB反相吸附树脂的粒径较佳的为50μm-120μm，孔径较佳的为更佳的为

本发明中，所述的上样的上样量较佳的为≤50mg/mL树脂。

本发明中，所述的上样聚苯乙烯-二乙烯苯反相吸附树脂柱的吸附流速较佳的为0.02BV/min-0.04BV/min，其中所述的BV/min为本领域常规计量术语，流速的一种表示方法，即单位时间通过的流体相当于树脂体积的倍数。

本发明中，所述的与上样液同pH的碱性水溶液较佳的为氢氧化钠水溶液。其中，所述的pH值较佳的为9-11，更佳的为10。

本发明中，所述的与上样液同pH的碱性水溶液的用量较佳的为4.5BV-5.5BV，更佳的为5BV。

本发明中，所述的正丁醇的用量较佳的为1.5BV-2.5BV。