[发明专利]邓老凉茶颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及一种广东凉茶的质量控制方法，具体涉及邓老凉茶颗粒高效液相色谱法指纹图谱的构建方法和标准指纹图谱。

背景技术

广东凉茶是岭南人民根据本地的气候和水土特性，在长期预防疾病与保健过程中以中医养生理论为指导，以中草药为基础，研制总结出来的具有清热解毒、生津止渴等功效的一类植物饮料。邓老凉茶是著名的广东凉茶之一，由金银花、菊花、白茅根、桑叶、蒲公英和甘草6味药材组成，具有清热解毒、祛湿生津、凉血排毒等功效，用于风热感冒、咽喉肿痛等症。现已有邓老凉茶含糖颗粒、无糖颗粒、罐装饮料、蜜炼膏、草本含片等剂型上市。

目前国内还没有文献报道对邓老凉茶质量控制的研究。中药指纹图谱技术是一种表征中药所含成分与其质量关系的有效手段，已成为国内外广泛认可的重要质量评价模式。因此，建立邓老凉茶制剂的标准指纹图谱，能从整体上全面反映制剂的内在质量，为其质量控制提供一种提供直观、简便、有效的手段。

发明内容

本发明的目的在于为邓老凉茶颗粒的质量控制和真伪鉴别提供一种新的方法，通过建立邓老凉茶颗粒指纹图谱的方法，并由此方法得到邓老凉茶制剂的标准指纹图谱。

为达到本发明的目的所采用的技术方案：用高效液相色谱法建立邓老凉茶颗粒指纹图谱的方法，具体包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：

A.绿原酸对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，用甲醇配制成每1ml含绿原酸0.2～0.5mg的溶液；

B.新绿原酸对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸对照品适量，用甲醇配制成每1ml含新绿原酸0.2～0.5mg的溶液；

C.异绿原酸A对照品溶液的制备：精密称取异绿原酸A对照品适量，用甲醇配制成每1ml含异绿原酸A 0.2～0.5mg的溶液；

D.异绿原酸B对照品溶液的制备：精密称取异绿原酸B对照品适量，用甲醇配制成每1ml含异绿原酸B 0.2～0.5mg的溶液；

E.混合对照品溶液的制备：分别吸取1.00mL绿原酸、新绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸B对照品溶液，组成混合对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：精密称取邓老凉茶颗粒0.5～20g，50％～100％甲醇提取，采用索氏提取或超声提取或微波辅助萃取或加速溶剂萃取方法进行提取，提取时间为10～150min，提取液浓缩定容至10～50mL，针孔式微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；

(3)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为0.1～3％磷酸溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱时间为20～180min，柱温：20～50℃，流速0.3～1.0mL/min，紫外检测波长240～262nm；

(4)测定：精密吸取供试品溶液0.5～10μl注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

(5)相似度评价：供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价，在240～262nm检测波长下的相似度均大于0.80。

本发明最佳的检测方法可以通过下述步骤实施：(2)供试品溶液的制备：称取邓老凉茶颗粒5.0g，用滤纸包好，置索氏提取器中，精密加入甲醇150mL，索氏提取1.5h，提取液旋转蒸馏浓缩至10mL，转移至25mL的容量瓶中，甲醇加至刻度，摇匀，针孔式微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。(3)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为0.5％的磷酸溶液，流动相B为乙腈，洗脱时间为20min，柱温：25℃，流速0.5mL/min，紫外检测波长254nm；

在步骤(3)中，所述的梯度洗脱，优选梯度洗脱程序以如下体积浓度配置进行：流动相A为0.5％的磷酸溶液，流动相B为乙腈。梯度洗脱程序如下：

0分钟时，流动相A为95％、流动相B为5％；

3分钟时，流动相A为95％、流动相B为5％；

9分钟时，流动相A为80％、流动相B为20％；

13分钟时，流动相A为80％、流动相B为20％；

20分钟时，流动相A为5％、流动相B为95％。