[发明专利]邓老凉茶颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

权利要求书

1.一种邓老凉茶颗粒制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于采用高效液相色谱法，具体包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：精密配制绿原酸、新绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B对照品溶液，浓度为0.2～0.5mg/mL；

(2)供试品溶液的制备：精密称取邓老凉茶颗粒，50％～100％甲醇提取，提取液浓缩定容后，针孔式微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；

(3)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，梯度洗脱，柱温：20～50℃，流速0.3～1.0mL/min，紫外检测；

(4)测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱；

(5)相似度评价：供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价。

2.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)供试品溶液的制备，精密称取邓老凉茶颗粒0.5～20g，采用索氏提取或超声提取或微波辅助萃取或加速溶剂萃取方法进行提取，提取时间为10～150min，提取液浓缩定容至10～50mL。

3.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于所述步骤(3)梯度洗脱的流动相为0.1～3％的磷酸溶液(A)和乙腈(B)，梯度洗脱时间为20～180min，紫外检测波长为240～262nm。

4.如权利要求3所述的邓老凉茶颗粒制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于步骤(3)色谱条件中所述的梯度洗脱，梯度洗脱程序以如下浓度配置进行：

0分钟时，流动相A为95％、流动相B为5％；

3分钟时，流动相A为95％、流动相B为5％；

9分钟时，流动相A为80％、流动相B为20％；

13分钟时，流动相A为80％、流动相B为20％；

20分钟时，流动相A为5％、流动相B为95％。

5.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于所述步骤(4)测定：精密吸取供试品溶液0.5～20μl注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。

6.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法，其特征是在于所述步骤(5)相似度评价：供试品指纹图谱在240～262nm检测波长下的相似度均大于0.80。

7.根据权利要求1所述的邓老凉茶颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于测定所得的指纹图谱中有16个特征共有峰，其中3号、4号、13号、14号色谱峰分别为绿原酸、新绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B参照峰，最强峰为3号色谱峰。