[发明专利]一种肠衣中多种大环内酯类兽药残留量的检测方法

权利要求书

1. 一种肠衣中多种大环内酯类兽药残留量的检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

（1）样品提取：

称取5 g肠衣样品置于50 mL具塞离心管中，加25 mL提取溶剂，涡旋，于4000 r/min离心3 min，将提取液收集于50mL容量瓶中，再加20 mL提取溶剂，重复上述操作，合并提取液，加提取溶剂定容至50 mL，精密量取10 mL提取液于20mL离心管中，在45℃以下水浴减压浓缩至近干，用10 mL缓冲溶液分次溶解残渣；

（2）固相萃取柱净化

将提取液转移过固相萃取柱，弃去流出液，用5 mL水和5 mL淋洗溶液依次洗涤离心管，洗涤液过C₁₈柱，弃去流出液，负压抽干，用6 mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液，在45℃以下水浴减压浓缩至近干，加2 mL样液溶解稀释液溶解，混匀，过0.22 μm 针筒滤膜，进行LC-MS/MS分析；

（3）液相色谱-质谱/质谱仪测定

按照色谱条件测定样品和标准溶液，质谱分离采用在正离子模式下进行母离子全扫描，再对其子离子进行全扫描，通过被测样品的质谱和相关信息，得到其定性和定量结果；定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物；定量测定时采用标准曲线法。

2.根据权利要求1所述的肠衣中多种大环内酯类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（1）中所述提取溶剂为甲醇或乙腈。

3.根据权利要求1所述的肠衣中多种大环内酯类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（1）中所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，配置方法为溶解13.8 g磷酸二氢钠于950 mL水中，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节溶液pH值到8.0，最后用水稀释至1。

4.根据权利要求1所述的肠衣中多种大环内酯类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（2）中所述中所述固相萃取柱为C18净化柱（500 mg/6 mL，或相当者）或HLB净化柱（Oasis ，500 mg/6 mL，或相当者）；C18净化柱和HLB净化柱使用前依次用5 mL甲醇、5 mL水预淋洗。

5.根据权利要求1所述的肠衣中多种大环内酯类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（2）中所述淋洗溶液为甲醇－水混合溶液（2+8,V/V）。

6.根据权利要求1所述的肠衣中多种大环内酯类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（2）中所述样液溶解稀释液为甲醇－水混合溶液（1+1,V/V）。

7.根据权利要求1所述的肠衣中多种大环内酯类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（3）中所述色谱分析条件为：

液相色谱条件：

色谱柱: ZORBAX Eclipse C₈柱, 150mm×4.6 mm(i.d) ,5μm；

流动相A:乙腈, 流动相B: 0.15%甲酸水溶液，梯度洗脱；

流速: 400 μL/min；

进样量:20μL；

串联质谱条件：

离子源:电喷雾离子源；

扫描方式:正离子扫描；

检测方式:多反应监测；

电喷雾电压(IS):4800 V；

雾化气压力(GS1):42 psi；

气帘气压力(CUR):25 psi；

辅助气流速(GS2):45 psi；

离子源温度(TEM):540 ℃；

碰撞气(CAD):6 psi；

分别设定母离子、子离子、去簇电压（DP）、碰撞室入口电压（EP）、碰撞室出口电压（CXP）、碰撞气能量（CE）。

8.根据权利要求1所述的肠衣中多种大环内酯类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（3）中所述标准溶液的配置方法为：配置单个标准储备液时选用甲醇为溶剂，配置混合标准储备液时选用空白样品溶液稀释或定容。