[发明专利]一种制备玉米Ⅱ型胚性愈伤组织的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备玉米II型胚性愈伤组织的方法。

背景技术

大多数玉米自交系能形成致密的I型愈伤组织，这种愈伤组织胚性差，继代后较难再生出植株；松脆的II型愈伤组织生长迅速，可以长期继代并保持胚性。尽管玉米II型愈伤组织的诱导受基因型限制大，但是由于其愈伤组织比较容易获得，再生能力较强，获得转化植株的周期相对较短，仍是目前应用最广泛的受体材料之一。

现已明确外植体的再生能力受遗传因素控制，而不同基因型幼胚胚性愈伤诱导率的差异已经有大量的论文报道。目前农杆菌介导的遗传转化的玉米材料多为A188、B73以及它们的衍生系，在很大程度上受到基因型的限制。

Hodges(1986)等发现，A188最易诱导出胚性愈伤组织并且再生能力也显著高于其它品系，以其为亲本的杂交后代也表现较高的体细胞再生能力，自交系A188是表现最突出的基因型，但这个品系的农艺性状表现很差，目的性状需经长时间的杂交转育才能转入有生产利用价值的玉米品种中。

随着粮食与能源的日趋紧张，高油玉米的发展将被受关注。目前有关高油玉米自交系的幼胚愈伤组织培养的研究报道较少。因此有必要建立一个优良的高油玉米再生体系，培育出再生能力强、具有高油性状、农艺性状好的材料，为高油材料遗传转化奠定基础。

I型愈伤：生长速度慢，结构致密，容易分化成苗，不能长期继代生长，有时可转化为II型愈伤；II型愈伤：生长速度快，松散易碎，色泽鲜艳，极易分化成苗，可以长期继代生长。III型愈伤：生长速度慢，结构疏松，色泽暗淡，有时成水渍状，无再生能力。国际上通用的用此种方法区分I型愈伤和II型愈伤，二者很容易区分。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种制备能产生II型胚性愈伤组织的玉米自交系的方法。

本发明所提供的制备能产生II型胚性愈伤组织的玉米自交系的方法，包括如下步骤：将出发玉米自交系进行自交，获得F1代种子；取F1代种子的幼胚进行胚性愈伤组织诱导，得到胚性愈伤组织，挑取II型胚性愈伤组织；将所述II型胚性愈伤组织再生培养得到玉米植株，得到的玉米植株即为目的玉米自交系。

上述过程中，所述胚性愈伤组织诱导的方法包括如下步骤：将所述F1代种子的幼胚接种到胚性愈伤组织诱导培养基上，进行胚性愈伤组织诱导培养；

上述任一所述过程中，所述胚性愈伤组织诱导培养的条件为于28℃的黑暗环境中培养2周；

上述任一所述过程中，所述胚性愈伤组织诱导培养基由N6培养基、2，4-D、肌醇、脯氨酸、蔗糖、水解酪蛋白和植物凝胶组成；

2，4-D在所述诱导培养基中的浓度为2.0-2.5mg/l，肌醇在所述诱导培养基中的浓度为0.1-0.17g/l，脯氨酸在所述诱导培养基中的浓度为2.6-2.9g/l，蔗糖在所述诱导培养基中的浓度为30g/l，水解酪蛋白在所述诱导培养基中的浓度为0.12-0.15g/l。

上述胚性愈伤组织诱导培养基中，植物凝胶在所述诱导培养基中的浓度为8g/l，一般为8g/l过高培养基太硬，不易于养分吸收；过低培养基太软，外植体易移动不利于生长。

上述任一所述过程中，所述将所述II型胚性愈伤组织再生培养得到玉米植株的方法包括如下步骤：将所述II型胚性愈伤组织进行胚状体诱导培养，得到胚状体；将所述胚状体接到分化培养基上，进行分化培养，得到玉米植株；

上述任一所述过程中，所述分化培养的条件为于28℃、光强2000lx-2300lx、每天光照14h-18h条件下培养13-16天；

上述任一所述过程中，所述分化培养基由MS培养基、肌醇、蔗糖、6-BA和植物凝胶组成；

肌醇在所述分化培养基中的浓度为0.1-0.17g/l，蔗糖在所述分化培养基中的浓度为30g/L-35g/L，6-BA在所述分化培养基中的浓度为0mg/L-0.5mg/L。

植物凝胶在所述分化培养基中的浓度为8g/l，一般为8g/l过高培养基太硬，不易于养分吸收；过低培养基太软，外植体易移动不利于生长。

上述任一所述过程中，所述胚状体诱导培养的方法包括如下步骤：将所述II型胚性愈伤组织接到胚状体诱导培养基上，进行胚状体诱导培养；

上述任一所述过程中，所述胚状体诱导培养的条件为26-29℃暗培养14-16天；

所述胚状体诱导培养基由MS培养基、肌醇、蔗糖和植物凝胶组成，肌醇在所述胚状体诱导培养基中的浓度为0.1-0.17g/l，蔗糖在所述胚状体诱导培养基中的浓度为60g/L-65g/L。