[发明专利]一种制备玉米Ⅱ型胚性愈伤组织的方法

权利要求书

1.一种制备能产生II型胚性愈伤组织的玉米自交系的方法，包括如下步骤：将出发玉米自交系进行自交，获得F1代种子；取F1代种子的幼胚进行胚性愈伤组织诱导，得到胚性愈伤组织，挑取II型胚性愈伤组织；将所述II型胚性愈伤组织再生培养得到玉米植株，得到的玉米植株即为目的玉米自交系。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述胚性愈伤组织诱导的方法包括如下步骤：将所述F1代种子的幼胚接种到胚性愈伤组织诱导培养基上，进行胚性愈伤组织诱导培养；

所述胚性愈伤组织诱导培养的条件为于28℃的黑暗环境中培养2周；

所述胚性愈伤组织诱导培养基由N6培养基、2，4-D、肌醇、脯氨酸、蔗糖、水解酪蛋白和植物凝胶组成；

2，4-D在所述诱导培养基中的浓度为2.0-2.5mg/l，肌醇在所述诱导培养基中的浓度为0.1-0.17g/l，脯氨酸在所述诱导培养基中的浓度为2.6-2.9g/l，蔗糖在所述诱导培养基中的浓度为30g/l，水解酪蛋白在所述诱导培养基中的浓度为0.12-0.15g/l。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述将所述II型胚性愈伤组织再生培养得到玉米植株的方法包括如下步骤：将所述II型胚性愈伤组织进行胚状体诱导培养，得到胚状体；将所述胚状体接到分化培养基上，进行分化培养，得到玉米植株；

所述分化培养的条件为于28℃、光强2000lx-2300lx、每天光照14h-18h条件下培养13-16天；

所述分化培养基由MS培养基、肌醇、蔗糖、6-BA和植物凝胶组成；

肌醇在所述分化培养基中的浓度为0.1-0.17g/l，蔗糖在所述分化培养基中的浓度为30g/L-35g/L，6-BA在所述分化培养基中的浓度为0mg/L-0.5mg/L。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述胚状体诱导培养的方法包括如下步骤：将所述II型胚性愈伤组织接到胚状体诱导培养基上，进行胚状体诱导培养；

所述胚状体诱导培养的条件为26-29℃暗培养14-16天；

所述胚状体诱导培养基由MS培养基、肌醇、蔗糖和植物凝胶组成，肌醇在所述胚状体诱导培养基中的浓度为0.1-0.17g/l，蔗糖在所述胚状体诱导培养基中的浓度为60g/L-65g/L。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述出发玉米自交系为高油自交系GY302。

6.一种制备玉米的II型胚性愈伤组织的方法，包括如下步骤：

1)按照权利要求1-5中任一所述方法制备得到能产生II型胚性愈伤组织的玉米自交系；

2)取所述能产生II型胚性愈伤组织的玉米自交系的幼胚，进行胚性愈伤组织诱导，得到玉米的II型胚性愈伤组织。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述胚性愈伤组织诱导的方法包括如下步骤：将所述幼胚接种到胚性愈伤组织诱导培养基上，进行胚性愈伤组织诱导培养；

所述胚性愈伤组织诱导培养的条件为于28℃的黑暗环境中培养2周；

所述胚性愈伤组织诱导培养基由N6培养基、2，4-D、肌醇、脯氨酸、蔗糖、水解酪蛋白和植物凝胶组成；

2，4-D在所述诱导培养基中的浓度为2.0-2.5mg/l，肌醇在所述诱导培养基中的浓度为0.1-0.17g/l，脯氨酸在所述诱导培养基中的浓度为2.6-2.9g/l，蔗糖在所述诱导培养基中的浓度为30g/l，水解酪蛋白在所述诱导培养基中的浓度为0.12-0.15g/l。