[发明专利]从大豆中提取分离大豆异黄酮单体化合物的方法

说明书

技术领域

本发明属于化工领域，具体是涉及一种从大豆中提取分离多种高纯度大豆异黄酮单体化合物的方法，主要是分离纯化黄豆黄苷（Glycitin）、大豆苷（Daidzin）、染料木苷（Genistin）、黄豆黄素（Glycitein）、大豆苷元（Daidzein）、染料木素（Genistein）等化合物。

背景技术

大豆异黄酮是大豆在生长过程中形成的次级代谢产物，是多酚类的混合物。大豆的多种营养、保健作用与大豆异黄酮有关。现代药理学研究表明，大豆异黄酮具有雌激素样作用，可预防妇女更年期综合征；具有预防、改善骨质疏松作用，减少骨质流失，同时增加机体对钙的吸收，增加骨密度；具有预防和治疗癌症作用，对乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌和皮肤癌及白血病有明显的治疗作用，也可预防卵巢癌、结肠癌、胃癌和前列腺癌的发生；具有预防心血管疾病作用，降低胆固醇、调节血脂，预防心血管疾病的发生；具有预防早老性痴呆症作用。

目前，从大豆中分离纯化高纯度化合物的方法已有报道。中国专利（大豆异黄酮主要单体组分的分离方法，申请号03135952.3）以含量不低于40％的大豆异黄酮的混合物为原料，以硅胶为吸附剂，以氯仿-甲醇溶液为洗脱体系，分离得到染料木素、大豆苷元、染料木苷、大豆苷四种大豆异黄酮的主要单体组分，各单体组分的含量均达到90％以上。中国专利（从大豆异黄酮苷元混合物中分离染料木素的方法，申请号201010114937.3）以离子液体或由离子液体与其他极性溶剂组成的二元混合溶剂为萃取剂，采用分馏萃取法从含有大豆黄素、染料木素和黄豆黄素的大豆异黄酮苷元混合物中分离得到染料木素。叶茂颖等（中压制备系统分离制备大豆异黄酮糖苷，粮食科技与经济，2009年04期）以大豆异黄酮初提物为原料，使用中压制备系统和ODSC18色谱柱，分离制备得到大豆苷、黄豆黄苷和染料木苷3种大豆异黄酮糖苷，纯度分别为99.69%、98.62%和96.26%。康少华等（硅胶柱层析法分离大豆异黄酮苷元的研究，中国酿造， 2009年 01期）利用硅胶柱层析分离得到染料木素、大豆苷元、黄豆黄素3种大豆异黄酮，纯度均超过90%。刘烨等（大孔吸附树脂分离纯化4种主要大豆异黄酮，中南药学，2007年 04期）利用大孔吸附树脂后用20%、25%、35%、45%、70%的乙醇溶液梯度洗脱，得到大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素4种大豆异黄酮成分，纯度分别为49.31%、60.38%、19.33%和8.14%。姚开等（大豆异黄酮主要单体组分的分离方法，四川大学学报(工程科学版)，2004年 03期）采用300～400目硅胶、以氯仿-甲醇洗脱体系洗脱，得到染料木苷、大豆苷、染料木素和大豆苷元4种主要单体组分。江和源等（高速逆流色谱法分离制备大豆异黄酮中的大豆苷和染料木苷，食品科学， 2004年 01期）采用高速逆流色谱法分离纯化大豆异黄酮中的大豆苷和染料木苷，纯度分别达到98.2%和99.2%。徐德平等（大豆异黄酮的分离鉴定与抗氧化作用的研究，南京农业大学学报， 2001年 03期）利用硅胶柱层析和氯仿、乙醇梯度洗脱， 得到大豆甙元和染料木素。用Saphadex LH-20 柱，甲醇、水梯度洗脱，结合TOYOpearl HW-40层析柱反复多次层析，得到大豆苷和染料木苷。

上述各种方法或采取多步进行分离，操作比较麻烦；或仅能得到一种或少数几种大豆异黄酮成分；或得到的成分纯度不高；或分离过程中要使用氯仿有毒溶剂。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便、分离量大，综合成本低，生产周期短的快速制备多种高纯度大豆异黄酮化合物的方法，一步分离纯化能得到高纯度的黄豆黄苷、大豆苷、染料木苷、黄豆黄素、大豆苷元、染料木素等多种大豆异黄酮单体化合物。

本发明的方案如下：

从大豆中提取分离大豆异黄酮单体化合物的方法，步骤为：

（1）大豆异黄酮提取物的制备：脱脂大豆豆粕，用乙醇或甲醇浸泡，用5-20倍体积的乙醇或甲醇渗漉提取，渗漉液经回收至无醇后喷雾干燥得到提取物粗粉，将提取物粗粉用丙酮回流提取、浓缩结晶，得到大豆异黄酮提取物；

（2）柱层析纯化：将大豆异黄酮提取物用甲醇溶解，上Superose 12柱进行层析分离纯化，用甲醇-水或乙醇-水为洗脱液进行洗脱，洗脱液流速为每小时1-10倍柱体积，流出液由紫外检测器在254 nm检测，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，得到高纯度的黄豆黄苷、大豆苷、染料木苷、黄豆黄素、大豆苷元、染料木素等多种大豆异黄酮单体化合物。