[发明专利]一种高效液相色谱-荧光法同时测定血清中酪氨酸、色氨酸和5-羟色胺含量的方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱-荧光法同时测定血清中酪氨酸、色氨酸和5-羟色胺含量的方法，其特征在于，以Atlantis C18色谱柱为固定相，所述色谱柱规格为4.6mm×150mm i.d.，5μm；以0.1mol/L KH₂PO₄：甲醇混合溶液为流动相，所述0.1mol/L KH₂PO₄与甲醇的体积比为85∶15；流动相pH值为4.3；流速为1.0ml/min；将待测样品经色谱柱洗脱、分离后，用荧光检测器进行分析、测定；荧光检测器激发波长和发射波长0～4min分别为228nm和306nm，4～7.5min为278nm和338nm，7.5min后为285nm和353nm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的荧光检测器为多波长荧光检测器。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的流动相使用前，用0.22μM的微孔滤膜过滤，超声脱气20min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：酪氨酸、色氨酸和5-羟色胺的标准工作液配制方法如下：准确称取酪氨酸、色氨酸和5-羟色胺，用2.5％v/v的高氯酸溶液溶解、混匀；分别配制成55μmol/L、49μmol/L、1.176μmol/L的标准工作液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：待测血清样品的处理：将空腹静脉血2ml于促凝管内，常温常速离心分离血清，取血清于eppendorf管内，加入等量5％高氯酸溶液，充分混匀后室温放置10min，10000r/min离心10min，取上清液20μL进样分析。