[发明专利]转录因子ORCA3和关键酶G10H双基因共转化提高喜树碱含量的方法无效
| 申请号： | 201110084106.0 | 申请日： | 2011-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN102212550A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 开国银;李姗姗;王伟;付雪晴;尤丽佳 | 申请（专利权）人： | 上海师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/06 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 吴瑾瑜 |
| 地址： | 200234 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转录 因子 orca3 关键 g10h 基因 转化 提高 喜树碱 含量 方法 | ||
1.转录因子ORCA3和关键酶G10H双基因共转化提高喜树碱含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将转录因子基因CrORCA3和香叶醇-10-脱氢酶基因CrG10H插入植物表达载体，构建重组载体；
(2)将步骤(1)所获得的重组载体转入发根农杆菌，构建含有重组载体的发根农杆菌；
(3)利用所构建的含有重组载体的发根农杆菌菌株遗传转化喜树，获得毛状根；
(4)检测步骤(3)毛状根中的CrORCA3和CrG10H基因，取筛选结果为阳性的转基因毛状根克隆。
2.权利要求1所述转录因子ORCA3和关键酶G10H双基因共转化提高喜树碱含量的方法，其特征在于，步骤(1)中的CrORCA3和CrG10H基因片段以长春花幼苗RNA为模板PCR获得。
3.权利要求1所述转录因子ORCA3和关键酶G10H双基因共转化提高喜树碱含量的方法，其特征在于，步骤(1)中的植物表达载体为pCAMBIA质粒或pBI质粒。
4.权利要求1所述转录因子ORCA3和关键酶G10H双基因共转化提高喜树碱含量的方法，其特征在于，步骤(2)所述的发根农杆菌为发根农杆菌菌株C58C1、发根农杆菌菌株A4或发根农杆菌菌株LBA9402。
5.权利要求1所述转录因子ORCA3和关键酶G10H双基因共转化提高喜树毛状根中喜树碱含量的方法，其特征在于，步骤(3)中用含有重组载体的发根农杆菌菌株遗传转化喜树下胚轴，获得毛状根。
6.权利要求1所述转录因子ORCA3和关键酶G10H双基因共转化提高喜树毛状根中喜树碱含量的方法，其特征在于，步骤(4)所述的检测方法为PCR及Southern blotting检测。
7.一种用于提高喜树碱含量的重组载体，其特征在于，含有转录因子基因CrORCA3和香叶醇-10-脱氢酶基因CrG10H。
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