[发明专利]一种人源性无血清培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种人源性无血清培养基，其特征在于：配方含有以终浓度计的治疗用人血清白蛋白溶液：1--10mg/ml、人重组胰岛素溶液：4--40μg/ml、人转铁蛋白溶液：30--60μg/ml、人胆固醇溶液：20--50μg/ml、人过氧化氢酶溶液：20--50μg/ml、2-巯基乙醇溶液：0.05--0.5mM、抗坏血酸溶液：25--100μg/ml、亚油酸溶液：1.5--25μg/ml、乙醇胺溶液：10-60μg/ml、人玻连蛋白溶液：0.1--1.0μg/ml、L-谷胺酰胺溶液：10.0--100μg/ml。

2.根据权利要求1所述的人源性无血清培养基的制备方法，其特征在于：

A.按常规方法配制浓度分别为的治疗用人血清白蛋白溶液50-500mg/ml、人重组胰岛素溶液500-2000μg/ml、人过氧化氢酶溶液1000-2500μg/ml、2-巯基乙醇溶液：25-250μg/ml、抗坏血酸溶液1250--5000μg/ml、乙醇胺溶液500-3000μg/ml、人玻连蛋白溶液50-500μg/ml、L-谷胺酰胺溶液500-5000μg/ml；

B、制备铁饱和的人转铁蛋白溶液：

(1)、先将16.22--27.30mg的FeCl₃用10--20ml的1mM HCl溶解，配成储存液，然后分装、冷冻保存于-20℃，得到1号储存液；

(2)、称取120--200mg的人转铁蛋白，溶于未加碳酸氢钠的4.0--10.0ml刀比科氏改良伊格氏(DMEM)中，再加入270--400μl的1号储存液，搅拌均匀，即得浓度为1500--3000μg/ml的铁饱和的人转铁蛋白溶液；

C、制备人胆固醇溶液：称取50--100mg的人胆固醇粉末，将50--100mg的人胆固醇粉末加入到50--100ml未加碳酸氢钠的DMEM中，用2cm直径肽探头的超声波振荡器振荡，在4℃冰箱内以最大振幅振荡1小时，使之完全乳化，先后用1.2μm和0.45μm的滤膜过滤除菌，即得浓度为1000-2500μg/ml的人胆固醇溶液，保存在-30℃；

D.制备亚油酸溶液：称取0.015-0.03g亚油酸溶于100ml标准乙醇中，充分振荡溶解，即得浓度为75-1250μg/ml的亚油酸溶液，保存在8℃；

E、将治疗用人血清白蛋白溶液、人重组胰岛素溶液、人转铁蛋白溶液、人胆固醇溶液、人过氧化氢酶溶液、2-巯基乙醇溶液、抗坏血酸溶液、亚油酸溶液、乙醇胺溶液、人玻连蛋白溶液和L-谷胺酰胺溶液混合在一起，搅拌均匀，再用伊斯科夫改良刀比科氏培养基稀释至1L/瓶，达到配方中的终浓度，即得人源性无血清培养基。