[发明专利]一种检测植物中目标蛋白的方法及其专用SPR生物传感器

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测植物中目标蛋白的方法及其专用SPR生物传感器。

背景技术

随着转基因植物以及产品的安全性问题日益受到关注，建立准确、可靠、便捷的转基因检测技术和检测平台对转基因植物商品化的检测非常重要。表面等离子共振(Surface plasmon resonance，SPR)生物传感器是近年来国际上迅速发展的光学生物化学检测技术。SPR生物传感器是将探针或配体固定于传感器芯片的金膜表面形成单分子层，当含有能与之作用的分析物的液体流经传感片表面时，分子间发生特异性结合并可引起传感片表面折射率的改变，通过检测SPR信号改变而监测分子间的相互作用。SPR生物传感器具有无需标记、灵敏准确、快速、能够实现在线连续以及高通量等检测特点，特别适合于生物分子之间相互作用，通过传感器芯片实时监测各类生物分子如多肽、蛋白质、寡核苷酸、寡聚糖和小分子信号物质之间相互作用的整个过程，并通过分析软件可以测定溶液中与固定相作用的物质的量。

目前通过检测目标蛋白鉴定转基因植物的常用的方法是酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosor-bent assay，ELISA)，ELISA具备了酶反应的高灵敏度和抗原抗体反应的特异性，具有简便、快速，费用低等特点。欧盟13个国家38个实验室用ELISA对转基因成分为2％的RR大豆样品中的EPSPS进行检测，准确率高达99％，检测限为0.35％。但易出现本底过高的问题，缺乏标准化，且只能检测未加工产品，并且只能检测有限种类的转基因生物。Western blot是植物基因工程中检测外源基因是否表达出蛋白质的权威方法，具有很高的灵敏性，但其操作较繁琐，费用较高，不适于快速、大量样品的检测。而SPR检测在蛋白检测方面具有其独特的优势：快速简便，实时检测，样品无需标记，高通量检测等优点，在转基因检测方面有相当大的发展潜力，目前通过SPR方法检测转基因植物中是否含有目标蛋白的研究尚未见报道。

例：苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)毒蛋白基因是目前世界范围内使用最广泛的抗虫基因，Bt转基因抗虫棉在我国的栽植面积逐年增加，有数据显示，河北省今年栽植的棉花中90％为抗虫棉品种，然而抗虫棉可能会像其他的转基因作物一样带来一些问题，诸如昆虫抗虫性增强，天敌数量减少，基因漂流，生物多样性被破坏等等，因此，对Bt转基因抗虫棉进行长期监测是非常必要的。

据粗略统计，目前已经发现了60群Bt杀虫晶体蛋白基因，根据它们杀虫范围和基因序列的同源性不同可粗分为六大类(CryI、CryII、CryIII、CryIV、CryV、Cyt)每一类中又可分为许多亚类，目前转入棉花的有CryIAc、CryIAb、CryIAc和CryIAb融合基因等几种对鳞翅目害虫有较强的抗性的Bt杀虫晶体蛋白基因。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种SPR生物传感器在辅助检测生物目标蛋白中的应用。

本发明提供了一种如下所述SPR生物传感器在辅助检测生物目标蛋白中的应用。

所述生物为植物；所述目标蛋白为抗虫蛋白。

所述植物为转入所述目标蛋白的编码基因的植物。

所述抗虫蛋白为Cry1Ac蛋白。

所述Cry1Ac蛋白为如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列2衍生的蛋白质。

所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

所述Cry1Ac蛋白的编码基因为如下1)或2)或3)所示的基因：

1)序列表中序列1所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白的DNA分子；

3)与1)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码具有相同功能蛋白的DNA分子。

所述严格条件可为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在68℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

本发明的另一个目的是提供一种用于辅助检测待测生物中目标蛋白的SPR生物传感器。

本发明提供的一种用于辅助检测待测生物中目标蛋白的SPR生物传感器，为将抗目标蛋白抗体以共价结合的方式偶联到传感芯片上，得到的SPR生物传感器。

所述抗目标蛋白抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；