[发明专利](E,E)-2-(苯甲基氨基羰基)-3-苯乙烯基丙烯腈及其衍生物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一类化合物在制备Bcl-2家族蛋白抑制剂类抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

Bcl-2小分子抑制剂通过模拟BH3结构域发挥作用，是一类有效的抗肿瘤药物。该类化合物通过模拟天然BH3-only肽，竞争结合在Bcl-2或者Mcl-1、Bcl-xL蛋白表面的BH3结构域，促使天然的BH3-only肽释放、激活，发挥促进凋亡的作用。所以，这一类小分子抑制剂适用于所有高表达Bcl-2，Mcl-1，和/或Bcl-xl蛋白的肿瘤，包括血液肿瘤和实体瘤。

本申请人多年从事Bcl-2抑制剂的分子设计、合成和药理学研究。曾经在PCT申请WO2010/054575A1中，公开了具有专一靶向性的Bcl-2家族蛋白(包括Bcl-2、Bcl-xL和Mcl-1蛋白)抑制剂——苊并杂环类化合物。根据fragment-based原则，申请人在已经申请专利并获得授权的小分子Bcl-2抑制剂-3-硫吗啉基-8-氧-8H-苊并[1，2-b]吡咯-9-腈(简称S1)的基础上，通过分子拆分和分子生长，获得了(E，E)-2-(苯甲基氨基羰基)-3-苯乙烯基丙烯腈。该化合物的结构曾经在CN100413845C中被公开(说明书第39页，实施例17)。但是在上述公开的专利说明书中，所保护的全部化合物被当做激酶调节剂的用途并且主要用于调节酪氨酸激酶的活性，优选用于抑制以高表达酪氨酸激酶为主要特征之一的血液肿瘤的细胞增殖，以及用于鉴定表达酪氨酸激酶的细胞，研究酪氨酸激酶的定位。然而本发明人经过研究发现该化合物并非如现有技术所述的是作为激酶调节剂在抑制细胞增殖中发挥作用，而是作为Bcl-2家族蛋白抑制剂，通过直接结合Bcl-2和/或Mcl-1和/或Bcl-xl蛋白，发挥了杀死肿瘤细胞的作用。基于上述研究的结果，发明人认为有必要给予该类化合物以更为准确的应用定位。

发明内容

发明人在最新的研究中发现，以(E，E)-2-(苯甲基氨基羰基)-3-苯乙烯基丙烯腈(下文也简称为3g)为代表的一类化合物通过直接结合Bcl-2和/或Mcl-1和/或Bcl-xl蛋白，发挥了杀死肿瘤细胞的作用，因此该化合物的应用不应当如现有技术所述的，局限于/优选用于以血液肿瘤为代表的激酶高表达的肿瘤，而是可以用于所有高表达Bcl-2和/或Mcl-1和/或Bcl-xl蛋白的恶性肿瘤。其次，这种杀伤肿瘤细胞的作用，可能间接导致酪氨酸激酶等激酶的下调，但是不依赖激酶的下调。再次，在没有酪氨酸激酶高表达的肿瘤中，只要符合该化合物的适应症，仍然可以用该类化合物进行治疗。第四，激酶尤其是酪氨酸激酶并非肿瘤特异性表达，因此激酶抑制剂类药物将具有相应的毒副作用和因此而来的禁忌症。

因此，本发明的目的是针对以(E，E)-2-(苯甲基氨基羰基)-3-苯乙烯基丙烯腈为代表的一类化合物杀伤肿瘤细胞的作用机制进行研究，从而为该类化合物的使用提供更准确的指导。

首先，本发明提供一种筛选能够被(E，E)-2-(苯甲基氨基羰基)-3-苯乙烯基丙烯腈及其衍生物诱导凋亡的肿瘤细胞的方法，该方法包括以下步骤(a)和/或(b)：

(a)检测肿瘤细胞中位于染色体18q21.3上Bcl-2基因拷贝数，以基因拷贝数大于对照2.8倍为基准，确定能够被(E，E)-2-(苯甲基氨基羰基)-3-苯乙烯基丙烯腈及其衍生物诱导凋亡的肿瘤细胞；

(b)对肿瘤细胞进行免疫组化染色，检测Mcl-1和/或Bcl-xL蛋白表达量，以免疫组化染色大于10％为基准，确定能够被(E，E)-2-(苯甲基氨基羰基)-3-苯乙烯基丙烯腈及其衍生物诱导凋亡的肿瘤细胞。

其中，所述的肿瘤细胞可以来自体外肿瘤细胞培养物，或是来自肿瘤患者，即离体的肿瘤细胞样本。