[发明专利]生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学、食品安全、兽药残留领域，具体地说，是涉及复杂生物样品中磺胺类抗生素多残留的高选择性、快速分离、富集和纯化方法。 

背景技术

磺胺类抗生素(Sulfonamides，SAs)是一类化学合成的抗生素，它对多数革兰氏阳性菌及某些革兰氏阴性菌有抑制作用，被广泛应用于治疗各种动物的细菌性感染疾病，但是磺胺类抗生素可导致机体过敏反应、破坏机体的造血系统、导致各种贫血症的发生。尤其是，目前抗生素在食品中的残留问题十分普遍，世界上许多国家都对动物源性食品中的抗生素残留限量作了严格规定，加拿大、欧盟、美国等国家规定动物组织中磺胺类药物总量的最大残留量是100μg/kg；我国农业部第235号文件规定其在动物源性食品中磺胺类抗生素的最高残留限量(MRL)为0.1mg/kg。因此，磺胺类抗生素的检测对保障我国动物性产品出口贸易的正常发展和人民身体健康具有重要意义。 

目前，对磺胺类抗生素残留的分析检测方法主要有分光光度法、示波极谱法、荧光光度法、毛细管电泳法(CE)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS)及用于快速检测的放射免疫法和酶联免疫法。但是由于样品基质的复杂性和多样性，常规检测方法和仪器往往无法从复杂的样品中准确的检测到痕量的违禁药物残留；而且复杂的样品基质会影响检测仪器的寿命，增加检测成本。同时，在检测过程中，样品的前期处理占用的时间和工作量通常占整个检测过程的60％以上，导致检测效率较低。 

中国发明专利申请CN200810052542.8所公开的《磺胺甲恶唑分子印迹聚合物的制备方法》，该申请采用磺胺甲恶唑为模板分子、甲基丙烯酸为功能单体、离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐为致孔剂、乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂、偶氮二异丁腈为引发剂，制备得到的分子印迹聚合物用于固相萃取和高效液相色谱填料对磺胺甲恶唑分子表现出较好的识别特异性。但是该申请中的分子印迹聚合物只对磺胺甲恶唑具有识别性，对其它的磺胺类抗生素则没有识别性。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状提供一种生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其通过利用对磺胺类抗生素特异的分子印迹聚合物作为基质固相分散萃取技术的填料，进一步通过对萃取条件的优化，建立一种复杂生物样品中磺胺类抗生素多残留分离纯化方法，以达到从复杂生物样品中快速、高选择性的分离和富集磺胺类抗生素多残留、有效的去除样品基质的干扰、同时提高了检测灵敏度和准确度的目的。 

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该生物样品中多残留磺胺类抗生素的高效分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤： 

(1)制备分子印迹聚合物：按模板分子：功能单体：交联剂的摩尔比1∶2～8∶25的比例配料，通过本体聚合法获得对磺胺类抗生素具有特异识别功能的分子印迹聚合物； 

其中，所述的模板分子为磺胺二甲氧嘧啶，所述的功能单体为甲基丙烯酸，所述的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯； 

(2)称取0.1-0.3g待分离生物样品于研钵中，用研钵磨碎，加入适量上述分子印迹聚合物，进一步匀浆后得到匀浆样品； 

(3)将所述的匀浆样品置于固相萃取小柱中，依次用2.0-4.0mL水、2.0-4.0mL10wt％乙腈水溶液淋洗，然后用3.0-5.0mL甲醇/甲酸混合溶液洗脱；磺胺类抗生素即溶于甲醇/甲酸洗脱液中从所述的待分离生物样品中分离出来； 

其中，所述甲醇/甲酸混合溶液中甲醇与甲酸的体积比为90∶10。 

较好的，步骤(2)中所述匀浆样品中待分离生物样品与所述分子印迹聚合物的重量比为2∶5。 

上述各方案中所采用的固相萃取小柱为聚丙烯固相萃取小柱，其能获得更佳的萃取效果。较好的，所述固相萃取小柱的体积可以为3-10mL。 

为获得理想的分离纯化效果，提高样品回收率，上述各方案中，步骤(3)中所述匀浆样品置于所述固相萃取小柱之前，可以先向所述的固相萃取小柱中预装20-30mg所述的分子印迹聚合物。