[发明专利]CD8α-白介素21-CD137复合物扩增激活淋巴细胞的方法

权利要求书

1.CD8α-白介素21-CD137复合物扩增激活淋巴细胞的方法，其特征在于：

(1)CD8α、白介素21和CD137是上述各蛋白质的全部多肽或是包括上述各蛋白质中具备功能的多肽成分；

(2)CD8α-白介素21-CD137复合物采用蛋白稳定表达系统，其中细胞系转录了稳定表达CD8α-白介素21-CD137复合物的表达载体，载体中含有病毒启动子和选择标记基因；

(3)外源表达载体进入宿主K562细胞后，激活启动子，培养细胞后即得到表达跨膜白介素21-CD137复合物的细胞；宿主K562细胞经过酸、碱或辐照后即得到用来扩增淋巴细胞的跨膜白介素21-CD137复合物；

(4)把跨膜白介素21-CD137复合物依次用：硫酸铵或乙醇沉淀，酸提取，阴离子或阳离子交换色谱，疏水作用层析，亲和层析，羟基磷灰石色谱法，色谱法和凝集素进行纯化，即得纯化复合物；纯化复合物用来扩增激活淋巴细胞生成LAK细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的白介素2、白介素21和CD137从人体分离的细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的扩增的淋巴细胞是外周血淋巴细胞、纯化的NK细胞、纯化的NK细胞和外周血淋巴细胞的组合、纯化的NK细胞或外周血淋巴细胞和别的淋巴细胞的组合、或白介素2和/或白介素21和/或CD137混合物注射进人体血管后作用的血液中所有白细胞；

其中纯化是指NK细胞代表总数的50％以上。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的培养液为：Eagle’s培养液加入10％人血清或10％小牛血清；或RPMI1640加入10％人血清或10％小牛血清；或F-10(Ham’s)Nutrient mixtures加入10％人血清或10％小牛血清。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的跨膜白介素21-CD137复合物的剂量在50pM～1nM；其中K562细胞与淋巴细胞的用量比例如下为，K562细胞∶淋巴细胞＝1～10∶1。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的K562细胞中加入跨膜白介素21-CD137复合物；K562细胞∶淋巴细胞＝1～4∶1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的宿主K562细胞经过强酸、强碱或高剂量辐照后即得到用来扩增淋巴细胞的跨膜白介素21-CD137复合物。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的跨膜白介素21-CD137复合物扩增的LAK细胞通过溶于生理盐水溶液，再用于静脉滴注。