[发明专利]山羊TNNT3基因及克隆山羊TNNT3基因编码区全序列的方法无效
申请号: | 201110074762.2 | 申请日: | 2011-03-28 |
公开(公告)号: | CN102181452A | 公开(公告)日: | 2011-09-14 |
发明(设计)人: | 陈浩林;徐刚毅;汪代华;吴婷婷 | 申请(专利权)人: | 四川农业大学 |
主分类号: | C12N15/12 | 分类号: | C12N15/12;C12N15/10;C07K14/47 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 625014 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 山羊 tnnt3 基因 克隆 编码 序列 方法 | ||
1.山羊TNNT3基因,其特征在于,其特征在于,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。
2.根据权利要求1所述的山羊TNNT3基因,其特征在于,所述基因的编码区序列为SEQ ID NO:2。
3.根据权利要求1所述的山羊TNNT3基因,其特征在于,所述基因的编码区序列编码氨基酸为SEQ ID NO:3。
4.权利要求1所述的山羊TNNT3基因的克隆方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一 提取山羊腿肌组织中的总RNA,然后将总RNA反转录成cDNA;
步骤二 引物的设计及PCR反应;依据已发表的牛的TNNT3基因的序列设计一对简并引物,上游引物在起始密码子的上游区域设计,下游引物在终止密码子的下游区域设计;所述简并引物为:
上游引物P1:5′-CAGCCGTAGAAAGCACC-3′
下游引物P2:5′-CACTCTACTTCCAGCACCC-3′
用所述cDNA为模板进行梯度PCR反应;
步骤三 PCR产物的回收和纯化;
步骤四 克隆。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述步骤二中,所述PCR反应体系为:PCR反应体系为50μl体系:25μL的2×Master Mix Tap,上下游引物各2.5μL,10μL的cDNA,10μL的ddH2O;反应条件为95℃预变性5min,35个循环(94℃,40s;53,40s;72℃,50s),最后72℃10min。
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