[发明专利]大白菜叶绿体来源的小RNA及其热响应作用

权利要求书

1.一种筛选具有热响应作用的小RNA的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将2-4周大小的热敏感白菜苗在46±0.5℃热处理1±0.1小时，作为热处理组；以未经热处理的2-4周大小的热敏感白菜苗作为对照组；

(2)分别提取热处理组和对照组白菜苗的RNA，分别获得热处理组和对照组的小RNA测序数据库，其中小RNA序列的长度为9-36nt；

(3)比较热处理组的小RNA测序数据库与对照组的小RNA测序数据库的序列信息，从热处理组的小RNA测序数据库中分离出相对于对照组的小RNA序列丰度显著下降2倍以上的小RNA序列，其即为具有热响应作用的小RNA。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的小RNA包括mRNA，rRNA，tRNA或基因间RNA。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，将2.5-3.5周大小的热敏感白菜苗在46±0.2℃热处理1±0.05小时，作为热处理组；以未经热处理的2.5-3.5周大小的热敏感白菜苗作为对照组。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，在分别提取热处理组和对照组白菜苗的RNA，还包括步骤：测序并分离出叶绿体相关的RNA序列。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，通过BLAST分析，将所述的RNA与叶绿体基因组序列进行匹配，从而分离出叶绿体相关的RNA序列。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过Northern blot方法进一步验证小RNA的表达情况。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，非热处理的阶段，所述的热敏感白菜在常温下培养。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的常温是22±3℃。

9.一种分离的小RNA，其是通过权利要求1-8任一所述的方法获得的。

10.如权利要求9所述的小RNA，其特征在于，所述的小RNA具有选自SEQID NO：1，SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

11.权利要求9或10所述的小RNA的用途，用于响应热信号，参与植物的抗热反应。