[发明专利]一种用于严重脓毒血症及急性肝衰竭的检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属免疫学技术领域，涉及一种用于严重脓毒血症及急性肝衰竭的检测试剂盒，该试剂盒可通过检测单核细胞分化能力，对脓毒血症及急性/慢加急肝衰竭患者外周血的检测，用于判断所述疾病的转归。

背景技术

严重脓毒血症（severe sepsis）和急性/慢加急性肝衰竭（acute/acute on chronic liver failure）属于危重症疾病范畴，其特点为：疾病均存在至少一个主要脏器的功能衰竭及严重的免疫系统紊乱，死亡率高。迄今为止，临床尚无能有效测定所述疾病转归的诊断试剂盒。医学上，严重脓毒血症的定义为：在系统性全身炎症反应综合征（system inflammatory response syndrome, SIRS）基础上出现第一个脏器功能衰竭48小时后的患者即为严重脓毒血症。急性（Acute liver failure,ALF）/慢加急（Acute on chronic liver failure,ACLF）肝衰竭的定义为：原来无肝病（ALF）或原有慢性肝炎或肝硬化病变基础（ACLF）的患者，在短期内因严重肝细胞损害而导致肝功能衰竭并/或出现肝性脑病为特征的肝衰竭症候群；该疾病患者进展迅速，死亡率高达60﹪-70﹪以上。严重脓毒血症和急性/慢加急性肝衰竭进展期均存在持续性代偿性抗炎反应综合征（CARS）,机体免疫系统处于严重的抑制状态；持续高强度的CARS（免疫麻痹）是机体免疫功能紊乱的一种病理状态，进入免疫麻痹状态后，患者易发生二次感染，加速病情恶化，并可导致多器官功能衰竭（MODS）；因此，持续、严重的CARS是提示严重脓毒血症及肝衰竭患者转归不佳的关键因素。目前尚无能有效预测上述疾病转归的有效手段，但目前通常采用的寻找疾病转归标志方法，是通过免疫抑制严重程度（CARS严重度）的水平来反映疾病预后。

作为先天性和适应性免疫门户的单核细胞（monocytes）是抑炎因子（IL-10）的主要靶细胞，CARS持续状态下单核细胞功能障碍是严重脓毒血症及急性/慢加急性肝衰竭患者免疫麻痹的重要特征。抗原提呈功能、细胞分化能力及分泌炎症因子（TNFα）能力为单核细胞主要的三种功能。有研究发现其抗原提呈功能的抑制程度具有预测严重脓毒血症及急性/慢加急性肝衰竭转归的能力。Antoniades等在分析50例急性药物性肝衰竭进展期患者后发现，当单核细胞HLA-DR表达下降至< 15%（健康者为70％左右）时患者预后不良的准确率高达98％。Wasmuth等对27例肝硬化（50％病因为酒精性）基础上发生的慢加急性肝衰竭进展期患者研究后也提示单核细胞HLA-DR表达持续下降是免疫抑制状态下疾病预后的有效指标。

因此，在持续性CARS环境下研究单核细胞功能变化是探索急性/慢加急性肝衰竭进展期转归预测的重要方向。目前急需一种通过检测单核细胞分化情况，对脓毒血症及急性/慢加急肝衰竭患者外周血进行检测，用于判断上述患者转归情况的检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于严重脓毒血症及急性肝衰竭的检测试剂盒，该试剂盒可通过检测单核细胞分化能力，对脓毒血症及急性/慢加急肝衰竭患者外周血的检测，用于判断所述疾病的转归。尤其是，该试剂盒通过检测单核细胞分化情况，对脓毒血症及急性/慢加急肝衰竭患者外周血进行检测，用于判断上述患者转归不良（死亡）还是转归良好（存活）。

本发明中，所述的严重脓毒血症的定义为在SIRS基础上出现第一个脏器功能衰竭48小时后的患者，第一个脏器可包括肺脏、肝脏、肾脏、脑、心等；本发明中的实施例中以肝脏或肺脏作为第一个累及脏器，但并不局限与肝脏或肺脏。

具体而言，本发明的用于严重脓毒血症及急性肝衰竭的检测试剂盒，其特征在于，包括但不局限于以下组成：

含枸橼酸钠的抗凝管、红细胞裂解液、PBS溶液、CD45人单克隆抗体、CD14人单克隆抗体、CD16人单克隆抗体和1％多聚甲醛固定液；

所述的CD45、CD14、CD16人单克隆抗体的浓度范围为0.00001μg/ml－100mg/ml；在本发明的实施例中，所述的CD45、CD14、CD16人单克隆抗体浓度优选为25μg/ml。

本发明中，所述试剂盒的检测流程至少包括以下步骤：

（1）采集3ml 患者外周静脉血放入含枸橼酸钾的抗凝管内，

本发明中优选是立即进入检测流程，若不能立即检测，室温保存应不超过4小时，保存期间避免剧烈震荡；

（2）取200微升上述全血种于外周血96孔板中的一孔，共6孔；