[发明专利]用于快速恒温基因突变检测的聚合酶链反应方法

权利要求书

1.一种用于基因检测的恒温聚合酶链式反应方法，所述方法包括：

A)针对待检测的靶基因DNA序列，围绕其扩增基因片段周围的5个不同区域提供如下5种引物：

(a)基于靶基因3’端的外部引物；

(b)基于靶基因3’端的外部引物内侧的转折引物；

(c)基于靶基因中间部位的激励扩增引物；

(d)基于靶基因外部引物内侧的折叠引物；和

(e)基于靶基因5’端的外部引物；

B)提供包含A)中所述引物的聚合酶链式反应体系，并将待测DNA样品加入所述反应体系中，其中如果该样品所含为双链DNA，则在将其加入所述反应体系之前，对该样品进行变性；

C)在50～70℃的恒温下进行聚合酶链式反应；

D)通过将待检测DNA的恒温基因扩增反应数据或图谱与阳性对照比较，获得基因检测结果。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测DNA样品来自：血液、组织或组织切片、培养细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述引物是合成的核酸引物或肽核酸合成的引物。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应体系包含：DNA、水、MgCl₂、4种dNTP、缓冲液、以及脂肪芽胞杆菌聚合酶。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应在55～65℃的温度下进行20～60分钟。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应数据或图谱是通过选自下组的方法获得的：生物标记物的定量分析或荧光标记物的定量分析。

7.一种引物组，其包括：

(a)基于靶基因3’端DNA序列的外部引物；

(b)基于靶基因3’端DNA序列的外部引物内侧的转折引物；

(c)基于靶基因DNA序列中间部位的激励扩增引物；

(d)基于靶基因DNA序列外部引物内侧的折叠引物；和

(e)基于靶基因DNA序列5’端的外部引物。

8.一种试剂盒，其包括：单独或混合的权利要求8所述引物组中的各成员；一个或多个容器。

9.权利要求7所述的引物组在制备用于恒温基因扩增或检测的聚合酶链反应的试剂盒中的用途。

10.权利要求7所述的引物组在聚合酶链式反应中的用途，所述反应选自：聚合酶链式反应扩增、环介导恒温聚合酶链式反应扩增、对称或不对称的单链聚合酶链式反应扩增。