[发明专利]HIV-1表型耐药检测载体及其构建方法有效
| 申请号： | 201110073304.7 | 申请日： | 2011-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN102199616A | 公开（公告）日： | 2011-09-28 |
| 发明（设计）人： | 陈德喜;乔录新;魏飞力;张玉林;丁渭;李宁 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学附属北京佑安医院 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/66;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京北新智诚知识产权代理有限公司 11100 | 代理人： | 景志 |
| 地址： | 100069 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | hiv 表型 耐药 检测 载体 及其 构建 方法 | ||
1.HIV-1表型耐药检测载体，其特征在于，所述载体结构如图6所示。
2.根据权利要求1所述的HIV-1表型耐药检测载体，其特征在于，所述载体的碱基序列如SEQ ID No.16所示。
3.一种权利要求1所述的HIV-1表型耐药检测载体的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)pcDNA6.2-gag-pol载体构建：利用限制性内切酶BamH1和BaglII切割pcDNA6.2gw_miR载体并重组加入gag-pol片段得到pcDNA6.2-gag-pol载体；
(2)pNL4-3-ATTR载体重建：利用Mscil限制性内切酶切割pNL4-3载体，删除原有pol区，自连形成缺失pol区的载体pNL4-3-1载体，利用限制性内切酶spe1和apa1切割plenti6 v5/dest得到ATTR片段，利用限制性内切酶spe1和apa1切割pNL4-3-1载体回收载体，将载体和ATTR片段定向连接，得到pNL4-3-ATTR载体；
(3)将pcDNA6.2-gag-pol质粒和pNL4-3-ATTR质粒利用invitrogen公司的BP LR试剂盒，经BP、LR反应后最终得到质粒pNL4-3-gag-pol，序列如SEQID No.16所示，结构如图6所示。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述pcDNA6.2-gag-pol载体如序列表SEQ ID No.12所示。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述pNL4-3-ATTR载体如序列表如SEQ ID No.15所示。
6.权利要求1或2所述载体在制备HIV-1表型耐药检测试剂盒中的用途。
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