[发明专利]一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素E残留量的测定方法

权利要求书

1.一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素E残留量的测定方法，其特征在于：所述测定方法包括如下步骤：

称取已粉碎的试样5.0g(精确至0.0001g)于50mL具塞离心管中，加入提取液25mL，均质2min后，4℃下10000r/min离心10min。转移上清液至另一离心管中，残渣中加入20mL提取液重复以上提取操作。合并2次提取上清液后，加入正己烷20mL涡旋2min，10000r/min离心10min，弃去上层液。下层液中再加入正己烷20mL重复以上脱脂操作，所得下层液待净化。

将上述所得试样提取液转移至Oasis HLB净化柱(用甲醇和水各6mL预洗活化)，先用10mL水洗涤，弃去流出液。再用3mL甲醇洗脱，收集洗脱液，于40℃水浴上氮气流下将有机相吹干。试样用甲醇溶解并定容到1.00mL后，混匀，经0.22μm滤膜过滤，得到试样处理液。

称取多粘菌素E标准品，用甲醇溶解后作为储备液，然后进一步用甲醇稀释为具有浓度梯度的标准使用液；

利用超高效液相色谱-串联四级杆液质联用仪对标准液和试样处理液进行检测；

计算结果，试样中多粘菌素E的计算公式为：

X=C×Vm×10001000]]>

式中：

X-试样中多粘菌素E的残留量，单位为微克每千克(ug/kg)；

C-试样处理液中多粘菌素E的浓度(ng/mL)；

V-试样提取液的最终定容体积，单位为毫升(m1)；

m-试样的称样量，单位为克(g)；

2.根据权利要求1所述的一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素E残留量的测定方法，其特征在于：所述甲醇和甲酸水溶液(6+4)提取，理想的提取液配比，很好的控制了杂质的干扰，并保证了回收率。

3.根据权利要求1所述的一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素E残留量的测定方法，其特征在于：均质提取时间为2min，此条件下具有最好的混合提取效率。

4.根据权利要求1所述的一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素E残留量的测定方法，其特征在于：4℃下离心10min，具有很好的分离效果。

5.根据权利要求1所述的一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素E残留量的测定方法，其特征在于：采用HLB固相萃取柱净化，具有很好的净化效果。

6.根据权利要求1所述的一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素E残留量的测定方法，其特征在于：所述利用超高效液相色谱-串联质谱仪对试样处理液进行检测的条件为：

液相色谱条件

分析柱：Acquity BEH-C18，2.1mm×50mm，1.7μm

流动相：乙腈+0.1％甲酸水溶液＝20+80

流速：0.2mL/min

进样量：10μL

质谱条件

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：正离子扫描；

检测方式：多反应监测；

电喷雾电压：3.0kv；

离子源温度：110℃；

去溶剂温度：400℃；

离子对、锥孔电压、碰撞能量见表1。

表1粘杆菌素的离子对、锥孔电压、碰撞能量

此条件下具有很好的分离效果

7.根据权利要求1所述的一种超高液相色谱-串联质谱对动物源性食品中多粘菌素E残留量的测定方法，其特征在于：利用较为先进、灵敏度高的超高效液相色谱-串联质谱仪对动物源性食品中多粘菌素E的残留量进行检测。