[发明专利]一种基于EGFP的T载体的制备方法

权利要求书

1.一种基于EGFP的T载体，其特征在于其中所述T载体的两个末端位于组成型启动子和EGFP基因之间，所述T载体应用于T-A克隆时，载体自连产生的假阳性菌落在日光下呈现绿色荧光，携有外源DNA的阳性菌落呈现白色。

2.根据权利要求1所述的一种基于EGFP的T载体的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）制备含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因表达盒的前T载体pPmG1，所述表达盒包括组成型启动子Pm、EGFP基因，以及位于两者之间的平末端酶切位点；

（2）用相应的限制性内切酶切割所述的前T载体，利用Taq DNA聚合酶将dTTP合成到线性化前T载体pPmG1的3’末端，使之具有凸起的T尾，制备成熟的T载体。

3.根据权利要求1所述的一种基于EGFP的T载体的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）制备含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因表达盒的前T载体pPmG2，所述表达盒包括组成型启动子Pm、EGFP基因，以及位于两者之间的两个串联的Xcm I酶切位点；

（2）用限制性内切酶Xcm I切割所述的前T载体pPmG2，直接获得在3’末端具有凸起的T尾的成熟的T载体。