[发明专利]人猴通用动脉粥样硬化检测引物组、检测芯片及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及能用于分析人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中动脉粥样硬化相关基因表达情况的检测引物组、荧光定量PCR检测芯片及检测方法。

背景技术

基因诊断诞生于20世纪70年代末，基因诊断是现代分子生物学的理论和技术与医学相结合的范例。基因诊断是病因的诊断，既特异又灵敏，其优点主要体现在以下几个方面：可以揭示尚未出现症状时与疾病相关的基因状态，从而可以对表型正常的携带者及某种疾病的易感者做出诊断和预测；也可以结合常规的临床诊断指标在临床诊断和预后评价中起重要作用；此外基因诊断指标还可用于新药评价。

美国SuperArray公司新近推出的第二代功能分类基因芯片（Real-time PCR芯片）基于第一代功能分类Oligo基因芯片，结合了实时定量PCR和第一代功能分类基因芯片的优点，可在一次实验中准确定量检测上百个基因的mRNA表达水平，不仅克服了实时定量PCR检测基因表达工作量大、耗时久的缺点，而且将基因芯片的检测精度提高到了与实时定量PCR相当的水平。

动脉粥样硬化存在着发生与发展的自然病程，在其发生、发展的过程中动脉粥样硬化相关基因的表达变化往往要早于传统的风险因素，且更能揭示疾病自然病程的本质。美国SuperArray公司研究人员已经开发出人和小鼠的动脉粥样硬化PCR芯片，目前，该芯片已经广泛应用于动脉粥样硬化临床诊断和研究当中。

但是上述动脉粥样硬化PCR芯片都有以下不足之处：

1．上述动脉粥样硬化PCR芯片没有明确适用于那种组织，考虑到基因表达的时空性，我们利用这些芯片进行高流通量检测时会有较大浪费；

2．目前尚缺乏适用于猴的动脉粥样硬化PCR芯片，这为我们利用猴，特别是模型猴作为实验动物进行动脉粥样硬化基因诊断研究带来不便。

发明内容

为了克服现有技术的上述不足，本发明一方面提供了一种能用于分析人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中动脉粥样硬化相关基因表达情况的PCR检测引物组；另一方面还提供了包含有上述引物组的荧光定量PCR检测芯片；同时本发明还提供了利用上述引物组对人和/或猴外周静脉血白细胞中动脉粥样硬化相关基因表达情况进行检测的方法。

本发明通过相关实验确定了人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中均能有效和特异性表达的动脉粥样硬化相关基因，然后通过比对人和食蟹猴的上述基因在GeneBank中公布的序列，针对共有的特异性序列分别设计引物，通过筛选最终获得本发明的能够在同样条件下扩增并用于分析人类和/或食蟹猴外周静脉血白细胞中动脉粥样硬化相关基因表达情况的引物组。

所述人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中均能有效和特异性表达的动脉粥样硬化相关基因包括应激反应相关基因。

所述人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中均能有效和特异性表达的动脉粥样硬化相关基因还包括粘附分子相关基因。

所述人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中均能有效和特异性表达的动脉粥样硬化相关基因还包括血栓相关基因。

所述人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中均能有效和特异性表达的动脉粥样硬化相关基因还包括细胞外基质相关基因。

所述人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中均能有效和特异性表达的动脉粥样硬化相关基因还包括脂代谢相关基因。

所述人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中均能有效和特异性表达的动脉粥样硬化相关基因还包括血液循环相关基因。

所述人类和食蟹猴外周静脉血白细胞中均能有效和特异性表达的动脉粥样硬化相关基因还包括凋亡相关基因。

本发明的目的之一在于提供一种人猴通用动脉粥样硬化相关基因检测引物组，包括分别用于扩增动脉粥样硬化相关基因ACE、APOA1、APOC1、APOF、CCL2、CD40LG、DBP、EDN1、FAS、FASLG、FGG、GLG1、GRN、ICAM1、IL18、IL1β、IL1RN、IL6、IL6ST、IL8、ITGα2β、ITGα4、ITGα6、ITGαM、ITGαV、ITGβ1、ITGβ2、LTA、LTB、MTHFR、NFKβ1、OLR1、PLAUR、PLTP、PON2、SELL、SELP、SELPG、SERPINE1、TIMP1、TNF、TNFRSF1B的扩增引物对，上述基因扩增引物对序列分别为SEQ ID NO：1-84所示的核苷酸序列。

各基因的扩增引物对对应的核苷酸序列如表1所示。