[发明专利]一种核酸的检测方法

权利要求书

1.一种核酸的检测方法，其特征在于其包括以下步骤：

1)根据待测样品的核酸序列，设计PCR扩增的引物、靶核酸序列检测探针和靶核酸序列捕获探针；

2)并将步骤1)设计好的的引物和靶核酸序列检测探针加入PCR扩增反应体系中，对待测样品进行PCR扩增，获得PCR扩增产物，所述PCR扩增产物中的靶核酸序列与所述靶核酸序列检测探针形成二元杂交复合物；

3)将步骤2)所得PCR扩增产物置于含有步骤1)中靶核酸序列捕获探针的核酸膜层析杂交试纸条上进行膜层析分离，所述核酸膜层析杂交试纸条上的靶核酸序列捕获探针捕获PCR扩增产物中的二元杂交复合物，形成三元杂交复合物；

4)通过荧光扫描仪读取步骤3)中的三元杂交复合物中的荧光信号，分析所得荧光信号即得核酸检测结果。

2.如权利要求1所述的一种核酸的检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述靶核酸序列检测探针的熔点低于所述PCR扩增体系的退火温度。

3.如权利要求1所述的一种核酸的检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述靶核酸序列检测探针至少有两种且标记有荧光染料，所述靶核酸序列捕获探针用生物素标记。

4.一种核酸膜层析杂交试纸条，其特征在于其包括加样垫、靶核酸序列捕获探针、层析膜、吸水垫和底衬，所述层析膜粘贴于底衬的中部，所述加样垫和吸水垫分别粘贴于所述层析膜两端，所述靶核酸序列捕获探针呈直线状固定在所述加样垫和吸水垫之间的层析膜上。

5.如权利要求4所述的一种核酸膜层析杂交试纸条，其特征在于所述加样垫为玻璃纤维，所述靶核酸序列捕获探针带有荧光染料，所述层析膜为尼龙膜、PVDF膜、聚酯膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜中的一种；所述吸水垫为棉仔绒、棉纤维或纤维素，所述底衬为聚氯乙烯或聚苯乙烯。

6.如权利要求4所述的一种核酸膜层析杂交试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1)将层析膜粘贴底衬的中部；

2)将加样垫和吸水垫分别粘贴于步骤1)所述层析膜的两端，并分别与层析膜相连接；

3)将靶核酸序列捕获探针呈直线状固定在所述加样垫和吸水垫之间的层析膜上，即得核酸膜层析杂交试纸条。

7.如权利要求6所述的一种核酸膜层析杂交试纸条的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述固定采用亲和素或抗体结合的方式。

8.一种人乳头瘤病毒的检测方法，其特征在于其包括以下步骤：

1)根据人乳头瘤病毒的核酸序列，设计PCR扩增的引物、人乳头瘤病毒序列检测探针和人乳头瘤病毒序列捕获探针；

2)将PCR扩增的引物和人乳头瘤病毒序列检测探针加入PCR扩增反应体系中，对待测人乳头瘤病毒进行PCR扩增，获得PCR扩增产物，所述PCR扩增产物中的人乳头瘤病毒序列与所述人乳头瘤病毒序列检测探针形成二元杂交复合物；

3)将所得PCR扩增产物置于含有步骤1)中人乳头瘤病毒序列捕获探针的核酸膜层析杂交试纸条上进行膜层析分离，所述核酸膜层析杂交试纸条上的人乳头瘤病毒序列捕获探针捕获PCR扩增产物中的二元杂交复合物，形成三元杂交复合物；

4)通过荧光扫描仪读取步骤3)中的三元杂交复合物中的荧光信号，分析所得荧光信号即得人乳头瘤病毒检测结果。