[发明专利]液相色谱-串连质谱法测定人参中真菌毒素含量的方法有效
申请号: | 201110067385.X | 申请日: | 2011-03-21 |
公开(公告)号: | CN102692469A | 公开(公告)日: | 2012-09-26 |
发明(设计)人: | 王柯;季申;许勇;毛丹;郑荣;王少敏;张道广;陈静;毛秀红;夏晶;胡青;李丽敏;吴赵云;郏征伟;苗水;陆继伟;陈铭;于建;王欣美;王枚博;简龙海;张甦;钟吉强;孙健;孟茜 | 申请(专利权)人: | 上海市食品药品检验所 |
主分类号: | G01N30/72 | 分类号: | G01N30/72;G01N30/06 |
代理公司: | 北京市金杜律师事务所 11256 | 代理人: | 郑立柱;谢燕军 |
地址: | 201203 上*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 色谱 串连 质谱法 测定 人参 真菌 毒素 含量 方法 | ||
技术领域
本发明涉及人参中真菌毒素含量的测定方法,具体涉及采用液相色谱-串连质谱法测定人参中真菌毒素含量的方法。
背景技术
真菌毒素(Mycotoxin),也称霉菌毒素,是真菌产生的次级代谢产物,一般同时具有毒性强和污染频率高的特点。由于真菌的寄生和真菌毒素的产生,严重影响农作物的产量,降低农产品和饲料品质,造成巨大经济损失。人或动物摄入被真菌毒素污染的农、畜产品,或通过吸入及皮肤接触真菌毒素可引发多种中毒症状。如致幻,催吐,出血症,皮炎,中枢神经受损,甚至死亡。动物试验和流行病学的调查结果还证实,许多真菌毒素还可在体内积累后产生致癌、致畸、致突变、类激素中毒,白细胞缺乏症等,对机体造成永久性损害(参见张艺兵等,农产品中真菌毒素的检测分析[M]北京:化学工业出版社,2006)。
目前研究关注的真菌毒素主要集中在黄曲霉毒素(aflatoxin),赭曲霉毒素(OA),呕吐毒素(DON),伏马毒素(FUM),玉米赤霉烯酮(ZEN),T-2毒素及展青霉素(PAT)等。随着对真菌毒素危害的深入研究,公众逐渐认识到其对社会经济和人类健康造成的严重威胁,各国政府对药品食品中真菌毒素的分布及检测也都予以了极大的关注,特别是欧盟及美国等发达国家更是对此设定了严格的限量规定。食品方面,我国已相继出台了很多有关真菌毒素的法定标准(参见GB2715-2005食品中真菌毒素限量[S]和GB2761-2005食品中真菌毒素限量[S]),但在药品领域,除中国药典收载了黄曲霉毒素的检测方法(参见中国人民共和国药典2010年版[S])外,尚无其他标准出台。而已有的食品标准均为针对单一的真菌毒素进行检测,尚无同时检测多成分残留的标准出台。
因此,急需开发药品特别是人参中真菌毒素多成分残留的高效测定方法。
发明内容
鉴于现有技术的上述缺陷,本发明提供一种采用液相色谱-串联质谱测定人参中真菌毒素含量的方法。该方法可用于人参中真菌毒素残留的筛查,为拟定药品中真菌毒素的标准提供技术服务。
本发明通过如下技术方案实现:
提供一种用于测定人参中真菌毒素含量的方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
(1)用HLB柱对待测人参样品进行预处理;
(2)通过液相色谱-串连质谱法测定经预处理后的人参样品中一种或多种真菌毒素的含量。
根据本发明的一个优选的实施方式,所述真菌毒素包括黄曲霉毒素、T-2毒素、伏马毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素或赭曲霉毒素A;其中所述黄曲霉毒素包括黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1或黄曲霉毒素G2。
根据本发明的一个优选的实施方式,所述HLB柱在预处理人参样品前先用甲醇洗脱,再用水洗脱。
根据本发明的一个优选的实施方式,所述人参样品的预处理包括用甲醇提取待测人参样品,上HLB柱并收集流出HLB柱的溶液的步骤;或包括用甲醇提取待测人参样品,上HLB柱并用甲醇洗脱,收集甲醇洗脱液的步骤。
根据本发明的一个特别优选的实施方式,人参样品的预处理包括:精密称取人参样品粉末,精密加入甲醇溶液,超声处理,离心,滤过,精密吸取上清液,用水稀释,摇匀,取稀释后的溶液通过已经处理好的HLB柱,直至有适量空气通过,收集流出HLB柱的溶液,用氮气缓慢吹干,精密加入甲醇溶液使溶解,即得;或在样品上HLB柱后用甲醇洗脱,收集甲醇洗脱液,氮气缓慢吹干后,精密加入甲醇溶液使溶解,离心,取上清液,即得。
根据本发明的一个优选的实施方式,所述步骤(2)中液相色谱-串连质谱法的色谱条件为:采用C18柱,流动相由A相和B相组成,A相为甲醇,B相为甲酸,采用梯度洗脱。
优选地,所述C18柱的粒径为1.7~5μm,柱内径2.1~4.6mm,柱长为5~10cm,更优选为ACQUITY UPLC BEH C18柱;B相的浓度为0.01~0.05%,优选0.01%(体积);A∶B体积比为5~95%∶95~5%,优选流速为0.2~0.4ml/min,优选0.3ml/min。
根据本发明的一个优选的实施方式,所述步骤(2)中液相色谱-串连质谱法的质谱条件为:采用电喷雾离子源,采用正负离子模式进行数据采集,去簇电压为-100~120伏、碰撞池能量为-48~53伏。
本发明方法还包括用各种真菌霉素的标准品绘制标准曲线,并由此计算人参样品中各种真菌霉素的含量。
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