[发明专利]高通量检测血清样本中十二种病原抗体的液相芯片及其制备方法和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高通量检测血清样本中东方马脑炎病毒抗体、西尼罗病毒抗体、黄热病毒抗体、土拉菌抗体、登革病毒抗体、禽流感病毒抗体、普氏立克次体病原体抗体、蜱传脑炎病毒抗体、Q热立克次体病原体抗体、委内瑞拉马脑炎病原体抗体、马秋波病毒抗体、西方马脑炎病毒抗体共十二种病原抗体的液相芯片及其制备方法和使用方法。

背景技术

东方马脑炎病毒传染性强，对人群危害性大，其临床表现与乙型脑炎很相似，病死率约在35%以上。该病毒也是目前国际社会列为防生物恐怖的主要种类之一，国内属一类管理的病毒种类，备受关注。

西尼罗热是由西尼罗病毒感染引起的急性传染病。人感染西尼罗病毒多数表现为隐性感染，约140～300个感染者中有1个临床病例。其症状为突然发热、头痛、背痛、肌肉痛等。发烧可表现为双波热，约半数病人可见皮疹。出疹时间在发热期或发热末期。皮疹可为玫瑰样疹或斑丘疹，部位主要在颈背和上肢，持续时间约为l周。

黄热病毒引起的急性传染病，病人常出现黄疸伴发热，故名。主要症状有发热、头痛、黄疸和出血等；黄热病的主要病变在肝、肾、心、胃、肠等内脏。轻型病例呈急性发病，有明显的发热、头痛、恶心、鼻衄、轻度黄疸和蛋白尿，几日后痊愈；重型病例常突然发病，表现寒战高热头痛、背痛、全身痛、恶心、呕吐、面红、眼结合膜充血、末梢血液中白细胞降低，持续数日后，症状减轻，然后再出现发热并开始有黄疸，伴出血倾向，表现为软腭出血点、鼻衄、牙龈出血、呕黑色血水，有时出现蛋白尿甚至无尿，50％病人出现相对缓脉，意识清醒，肝功能受损，血胆红质增高，凝血酶原时间延长，转氨酶升高，肝病重时可出现低血糖，10～60％病人在6～8日后出现休克、昏迷以致死亡。

土拉菌病是由土拉弗朗西斯菌引起的多种野生动物、家畜及人共患病，亦称野兔热。临床上以体温升高、淋巴结肿大、脾和其他内脏坏死为特征，土拉菌可以被用作生物战中的致病病菌，感染者会出现高烧、浑身疼痛、腺体肿大和咽食困难等症状。

登革热是登革热病毒引起、依蚊传播的一种急性传染病。临床特征为起病急骤，高热，全身肌肉、骨髓及关节痛，极度疲乏，部分患可有皮疹、出血倾向和淋巴结肿大。

禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，也能感染人类，人感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡，病死率很高，通常人感染禽流感死亡率约为百分之33。此病可通过消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等多种途径传播，区域间的人员和车辆往来是传播本病的重要途径。

感染委内瑞拉马脑炎病毒潜伏期2～5天，大多表现为流感样症状，发冷、发热、头痛、肌痛（以下背部及腿部明显）及恶心、呕吐等。可有心动过速、结膜炎和非渗出性咽峡炎等体征，约4～6天上述症状消失，仅有少数患者有嗜睡、昏迷、抽搐、痉挛性瘫痪及中枢性呼吸型衰竭等脑炎的典型表现，末梢血白细胞轻度增高，有脑炎表现者脑脊液呈病毒性脑炎特点。

免疫学方法酶联免疫实验（ELISA）中利用抗原与抗体特异性反应来检测抗原或抗体主要有由双抗原夹心测抗体、双抗体夹心测抗原、竞争法、间接法等。间接法测抗体的原理是特异性抗原结合到固相载体上，然后和待检血清中的相应抗体结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记二抗与免疫复合物中的抗体结合形成酶标记二抗-抗体-固相抗原复合物，加底物显色，判断抗体含量。

液相芯片技术，是20世纪70年代美国Luminex公司研制出的新一代生物芯片技术，利用带编码的微球体作为载体，流式细胞仪作为检测平台，对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定。目前，该技术已广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、抗体筛选及受体与配体的识别分析等领域。

目前发展的液相芯片主要是基于实验室检测方法的建立和方法评价及优化，以缩短检测时间，降低检测成本。但是液相芯片方法是否能够高通量检测人血清中的东方马脑炎病毒抗体、西尼罗病毒抗体、黄热病毒抗体、土拉菌抗体、登革病毒抗体、禽流感病毒抗体、普氏立克次体病原体抗体、蜱传脑炎病毒抗体、Q热立克次体病原体抗体、委内瑞拉马脑炎病原体抗体、马秋波病毒抗体、西方马脑炎病毒抗体共十二种抗体，其定量检测能力如何，尚缺乏模型和评价。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高通量检测血清样本中东方马脑炎病毒抗体、西尼罗病毒抗体、黄热病毒抗体、土拉菌抗体、登革病毒抗体、禽流感病毒抗体、普氏立克次体病原体抗体、蜱传脑炎病毒抗体、Q热立克次体病原体抗体、委内瑞拉马脑炎病原体抗体、马秋波病毒抗体、西方马脑炎病毒抗体，共十二种病原抗体的液相芯片。