[发明专利]鲍肌肉萎缩症病毒的快速诊断试剂盒及检测方法

权利要求书

1.鲍肌肉萎缩症病毒的快速诊断试剂盒，其特征在于，其包括以下部件：

(1)DNA提取液；

(2)消化液；

(3)G1液：用于PCR一扩反应，包括含Mg2+的Buffer、dNTP、正向引物F1、反向引物R1和Taq酶；

F1为：5-ATGACAGATTTCACCGTAAGCAATGAAAATC-3，

R1为：5-CTAGCTGGCTTTGGTATAAGTAGTACCAAAAG-3；

(4)阳性对照H液：100ng/μL肌肉萎缩症病毒感染的鲍基因组DNA。

2.根据权利要求1所述的鲍肌肉萎缩症病毒的快速诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括以下部件：

(5)G2液：用于PCR二扩反应，包括含mg²⁺的Buffer、dNTP、正向引物F2、反向引物R2和Taq酶；

F2为：5-GCAACATTCCAGTTAGCC-3，

R2为：5-CCGTAGTAGCAGGAGCAA-3。

3.根据权利要求2所述的鲍肌肉萎缩症病毒的快速诊断试剂盒，其特征在于：所述PCR一扩反应液G1液中，含3mmol/L Mg²⁺、100mmol/L KCl、400μmol/LdNTPs、2μmol/L正向引物F1、2μmol/L反向引物R1、4U的Taq酶；

所述PCR二扩反应液G2液中，含3mmol/L Mg²⁺、100mmol/L KCl、400μmol/LdNTPs、2μmol/L正向引物F2、2μmol/L反向引物R2、4U的Taq酶。

4.根据权利要求1或2或3所述的鲍肌肉萎缩症病毒的快速诊断试剂盒，其特征在于，所述的DNA提取液部件包括以下六种分别独立盛装在试剂容器中的溶液：

①A液：10mmol/L Tris-Cl(pH8.0)，1mmol/L EDTA和0.1％(m/V)SDS的混合溶液；

②B液：12mL的5mol/L醋酸钾，2.3mL冰醋酸和5.7mL水的混合溶液；

③C液：异丙醇；

④D液：70％乙醇；

⑤E液：10mmol/L Tris-cl(pH8.0)和1mmol/L EDTA的混合溶液；

所述的消化液包括以下两种分别独立盛装在试剂容器中的溶液：

⑥F1液：20mg/mL蛋白酶K；

⑦F2液：4mg/mL RNase A。

5.根据权利要求4所述的鲍肌肉萎缩症病毒的快速诊断试剂盒，其特征在于，所述的肌肉萎缩症病毒感染的鲍基因组DNA下方法制备：

1)取肌肉萎缩症病毒感染的杂色鲍外套膜或肌肉组织样本10-20mg加入400-800μL A液进行稀释，于匀浆器中冰浴匀浆得匀浆液；

2)在步骤1)的匀浆液中加入2-4μL F1液，50-60℃放置消化2-4个小时；

3)待步骤2)中的经F1液消化处理的匀浆液降至室温，加入2-4μL F2液，在37℃放置消化2-4个小时得到消化溶液；

4)在步骤3)的消化溶液中加入100-300μL B液，剧烈震荡10-30s；然后在4℃下离心1-5min，取上清液，加入等体积C液混匀，再在4℃下离心1-5min，弃上清液，所得的沉淀物用400～800μL预冷的D液洗涤后，4℃离心1-5min；

5)所述步骤4)中经洗涤后的沉淀物经干燥后，加50-150μL E液溶解，得到肌肉萎缩症病毒感染的鲍基因组DNA。