[发明专利]一种定量检测血浆中益母草碱含量的方法

权利要求书

1.一种定量检测血浆中益母草碱含量的方法，其特征在于，采用高效液相色谱串联质谱技术，用苯甲酰精氨酸乙酯作为检测物的内标，用高氯酸沉淀蛋白方法预处理血浆样品，按内标法以峰面积，计算血浆中益母草碱血药浓度；

所述的益母草碱分子式为C₁₄H₂₁N₃O₅，分子量为311，结构式为：

（Ⅰ）         。

2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的液相色谱液相色谱采用安捷伦Zorbax SB-C18 柱为固定相，乙腈/乙酸铵缓冲液混合液为流动相，等度洗脱，质谱采用电喷雾电离源，用多离子反应监测对益母草碱定量。

3.按权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一 样品预处理

采用沉淀血浆蛋白作为血浆预处理方法，用10%高氯酸作为沉淀剂；

步骤二 液相分离

（1）流动相：由体积比为25%的乙腈与75%的乙酸铵缓冲液组成；

（2）色谱柱：采用安捷伦Zorbax SB-C18 柱，色谱柱内径2.1mm，填料粒径5μm，色谱柱长度150mm；

（3）洗脱方法：采用等度洗脱，流速0.2mL/min，色谱柱温度为27℃；

步骤三 质谱检测

采用正离子电喷雾电离源模式，用多离子反应监测，离子选择通道：益母草碱(m/z)⁺ 312.2/181.1，内标为(m/z)⁺ 307.3/105.0，离子通道范围为±1.0amu；

步骤四 浓度检测方法和检测限

按内标法以峰面积计算血中益母草碱的含量；其中，最低定量限为4ng/mL，定量范围为4-256ng/mL，线性相关系数在0.995以上，定量下限精密度小于20%，其余质控批内、批间精密度均小于15%，准确度85%-115% 。

4.按权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤二中75%的乙酸铵缓冲液含10mM乙酸铵、0.6%乙酸。

5.按权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤三中的内标是苯甲酰精氨酸乙酯。

6.权利要求1的定量检测血浆中益母草碱含量的方法在计算血浆中益母草碱血药浓度中的用途。

7.按权利要求1用途，其特征在于，所述血浆中益母草碱含量是大鼠血浆中益母草碱的含量。