[发明专利]人乳腺癌基因分型实时荧光定量PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生理生化检测领域，具体地涉及一种人乳腺癌基因分型实时荧光定量PCR检测方法。

背景技术

乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，全世界每年约有一百多万妇女患有乳腺癌，并且大约有50万名妇女死于该疾病。近年来，在中国乳腺癌的发病率呈明显上升趋势，尤其是在沿海经济发达地区，乳腺癌发病率已居于女性恶性肿瘤的首位。乳腺癌预后与癌细胞的侵袭和早期转移密切相关而转移是导致乳腺癌患者死亡的主要原因。如何早期将具有潜在转移危险的患者筛选出来，给予有针对性的治疗是提高乳腺癌生存率的关键所在。

ER、PR和HER-2受体的状态既与患者的预后相关，又能预测治疗的反应性。因此，在临床上，被作为一种公认的基因分型及预后因子而纳入治疗指南，其检测结果作为制定患者治疗方案及预后判断的最重要指标。

雌激素受体(ER)属于能和小分子疏水配体结合的核受体超家族成员，介导雌激素的多向效应。与雌激素结合时，热休克蛋白分离，丝氨酸与苏氨酸磷酸化，然后受体与另一ER单体发生二聚化作用，激活E-ER复合物，并促进受体二聚物与位于靶基因启动子区域的雌激素反应原件(ERE)结合，诱发或抑制基本转录机制的装配，刺激靶基因转录，从而调节雌激素促进细胞增生，分化和维持正常的生理功能。ER在人体内广泛分布，除生殖系统外，其它组织如骨骼、心脏、血管、神经、肝脏、皮肤等均有发现。ER包括ERα、ERβ两种亚型。ERα的表达状态与乳腺癌患者的预后明显相关，并指导内分泌治疗，是选择治疗方案的重要标志物(Speirs V，Kerin MJ. Prognostic significance of oestrogen receptor beta in breast cancer. Br J Surg，2000，87(9)：1248-9)。Ricketts等发现在正常人乳腺组织中ERα表达水平较低，平均为4 fmol/mg，肿瘤发生后，根据ERα表达水平的高低可以将乳腺癌病人分为ERα阳性和ERα阴性两类，早期的乳腺癌病人大约有60%为ERα阳性, 癌组织中ERα表达升高，可以达到100 fmol/mg，其中2/3的病人对内分泌治疗有效。超过1/3的早期病人为ERα阴性, 癌组织中几乎检测不到ERα的表达。而且随着肿瘤的发展，部分ERα阳性病人可能转变为ERα阴性，同时内分泌治疗也失去疗效(Ricketts D, Turnbull L, Ryall G, et al. Estrogen and progesterone receptors in the normal female breast. Cancer Res, 1991, 51(7): 1817?1822)。英国诺丁汉城市医院国家卫生联合协会Rakha等对1944例对可手术的原发侵袭性乳腺癌的长期随访资料显示：ER阳性乳腺癌多见于年长、绝经后妇女，肿瘤分化程度中等，对三苯氧胺(TAM)和芳香化酶抑制剂等内分泌治疗有效；ER阴性多见于年轻、绝经前妇女，肿瘤分化程度低，对内分泌治疗基本无效(Rakha EA, El-Sayed ME, Green AR, et al.Biologic and clinical characteristics of breast cancer with single hormone receptor positive phenotype. J Clin Oncol, 2007, 25(30): 4772-8)。ER阳性如有复发时常倾向于皮肤、软组织或骨转移；ER阴性则倾向于内脏转移，预后效果较ER阳性差。