[发明专利]人乳腺癌基因分型实时荧光定量PCR检测方法无效

申请号：	201110061529.0	申请日：	2011-03-15
公开（公告）号：	CN102676641A	公开（公告）日：	2012-09-19
发明（设计）人：	彭金彪;陈晶;陆敬舟;程朝平	申请（专利权）人：	上海易瑞生物科技有限公司
主分类号：	C12Q1/68	分类号：	C12Q1/68
代理公司：	上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257	代理人：	董红曼
地址：	201203 上海***	国省代码：	上海;31
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摘要：
搜索关键词：	乳腺癌基因实时荧光定量 pcr 检测方法
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【权利要求书】：

1.一种人乳腺癌基因分型实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述方法是以人乳腺癌相关基因ERα（SEQ ID 9）、PR（SEQ ID 10）、HER-2（SEQ ID 11）作为扩增的靶基因序列，以18S rRNA（SEQ ID 12）作为内参基因，分别设计与所述ERα、PR、HER-2、18S rRNA基因相对应的特异性引物，采用实时荧光定量PCR方法检测待测样品和对照样品的C_T值，计算靶基因表达量；利用ΔΔCT法对靶基因表达量进行分析，所述靶基因表达量=2^-ΔΔCT，ΔΔC_T= ( C_T,target- C_T,18S)_(detected)- ( C_T,target- C_T,18S)_(control)；当所述靶基因表达量≤1时，所述ERα、PR、HER-2基因为阴性分型；当所述靶基因表达量＞1时，所述ERα、PR、HER-2基因为阳性分型。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述方法是以pMD^?19-T作为质粒载体，分别以基因片段ERα（SEQ ID 13）、PR（SEQ ID 14）、HER-2（SEQ ID 15）、18S rRNA（SEQ ID 16）构建重组质粒作为标准品。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，与所述ERα基因相对应的引物序列为：

正向：5'- ACCGAAGAGGAGGGAGAATG-3'（SEQ ID 1）；

反向：5'- AACAAGGCACTGACCATCTG-3'（SEQ ID 2）。

4.如权利要求1所述方法，其特征在于，与所述PR基因相对应的引物序列为：

正向：5'- TTCACCAGGTCAAGACATACAG-3'（SEQ ID 3）；

反向：5'- GTTGCCTCTCGCCTAGTTG-3'（SEQ ID 4）。

5.如权利要求1所述方法，其特征在于，与所述HER-2基因相对应的引物序列为：

正向：5'- TTACCAGTGCCAATATCCAGG -3'（SEQ ID 5）；

反向：5'- TCCAGAGTCTCAAACACTTGG -3'（SEQ ID 6）。

6.如权利要求1所述方法，其特征在于，与所述18S rRNA基因相对应的引物序列为：

正向：5'- ATACCGCAGCTAGGAATAATGG-3' (SEQ ID 7)；