[发明专利]检测肌钙蛋白I的试剂盒及其制备和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋白检测方法及试剂盒，具体涉及检测检测肌钙蛋白I的试剂盒及其制备方法，还涉及用该试剂盒检测肌钙蛋白I的方法。

背景技术

心肌损伤标志物是指在循环血液中可测出的生物化学物质并能够敏感、特异地反映心肌损伤(异常)及其严重程度的标志物，因而其可以用于心肌损伤(异常)的筛查、诊断、评定预后和随访治疗效果。在正常情况下，心肌损伤标志物主要或仅存在于心脏(心肌)，在心脏或心血管异常情况下由心脏大量释放。心脏标志物主要包括肌红蛋白、肌钙蛋白(cTn I和cTn T)、肌酸激酶同功酶(CK-MB)等。其中cTn I和cTn T被美国和欧洲心脏病协会一致评为诊断急性心肌梗塞的高特异性和高敏感性的确诊标志物。在心肌细胞损伤早期，游离于胞浆内的cTn I和cTn T快速释放出来，在血清/血浆中，3-6h升高，8-14h达到高峰，1-2周降至正常。因而对于早期cTn I/cTn T的检测有助于为患者的治疗赢得宝贵时间，并且对发病后较晚就诊的病人也有很大意义。近年来，研究表明，当骨骼肌损伤和肾功能衰弱时也会有cTn T的显著升高，而cTn I则不会，因而cTn I更适宜于作为心肌梗塞的诊断标志物，特异性更强。

当前检测cTn I的常用方法主要有酶联免疫吸附测定(ELISA)、化学发光法、胶体金免疫层析(GICA)等。酶联免疫吸附测定的检测灵敏度较高，但操作过程相对比较复杂，检测所需时间较长；需要专门的仪器设备如酶标仪来配合使用，操作人员需要经过专业培训；检测所需费用较高，不能实现单人份检测。化学发光法精密度和灵敏度好，但需要专用设备，且仪器与试剂价格均较为昂贵，不适宜于小型医院及医疗点。胶体金免疫层析操作简单，检测所需时间短，不需要专业技术人员操作，检测费用低，但该法只能实现定性或半定量检测，检测灵敏度较低，不能检测到超低浓度下的肌钙蛋白I。

发明内容

针对现有技术在推广使用中的局限性，本发明提供一种采用便携式荧光检测仪便可实现定量检测的高灵敏检测试剂盒，其使用简单、检测速度快、成本低，可用于床边诊断。

本发明的检测肌钙蛋白I的试剂盒包括底板，从所述底板上的一端至另一端设置有依次连接的样品垫、交联物垫、连结垫、硝酸纤维素膜、吸水纸，交联物垫包被了荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体的交联物，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和质控条带，所述检测条带设置于靠近连结垫的一侧并含有抗肌钙蛋白I单克隆抗体，所述质控条带设置于远离连结垫的一侧并含有羊抗鼠IgG。

优选地，所述样品垫、交联物垫、连结垫、硝酸纤维素膜、吸水纸分别在各自连接处相互重叠。

优选地，所述交联物垫覆盖在所述样品垫与连结垫上。

优选地，所述样品垫与连结垫对接在一起，所述交联物垫覆盖在所述样品垫与连结垫上。

本发明还提供所述试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备二氧化硅纳米颗粒：用含有环己烷、正己醇、Triton X-100的油包水微乳体系制备二氧化硅纳米颗粒；

(2)制备荧光二氧化硅纳米颗粒：用3-氨丙基三甲氧基硅烷将所述二氧化硅纳米颗粒表面氨基化，再通过共价交联的方式在其表面交联上稀土荧光螯合物；

(3)制备荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体交联物：用高碘酸钠将标记用抗肌钙蛋白I单克隆抗体氧化，再将所述抗体与表面氨基化的荧光二氧化硅纳米颗粒混匀，发生共价反应而形成荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体交联物；

(4)制备交联物垫：将所述荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体交联物包被于玻璃纤维上制成交联物垫；

(5)制备硝酸纤维素膜：用喷膜仪分别将抗肌钙蛋白I单克隆抗体和羊抗鼠IgG设置且包被于硝酸纤维素膜的检测条带和控制条带上，37℃下充分干燥。

(6)依次将样品垫、交联物垫、连结垫、硝酸纤维素膜和吸水纸相互连接地粘贴至聚氯乙烯底板上。

优选地，在所述步骤(1)中，将比例为3∶1∶1的环己烷、Triton X-100、正己醇混匀，在搅拌下依次加入超纯水、氨水和四乙基原硅酸盐，搅拌24h，用丙酮封闭，采用无水乙醇和超纯水洗涤，即制得二氧化硅纳米颗粒；