[发明专利]检测肌钙蛋白I的试剂盒及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种检测肌钙蛋白I的试剂盒，所述试剂盒包括底板，从所述底板上的一端至另一端设置有依次连接的样品垫、交联物垫、连结垫、硝酸纤维素膜、吸水纸，其特征在于，交联物垫包被了荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体的交联物，所述硝酸纤维素膜设置有检测条带和质控条带，所述检测条带设置于靠近连结垫的一侧并含有抗肌钙蛋白I单克隆抗体，所述质控条带设置于远离连结垫的一侧并含有羊抗鼠IgG。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样品垫、交联物垫、连结垫、硝酸纤维素膜、吸水纸分别在各自连接处相互重叠。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述交联物垫覆盖在所述样品垫与连结垫上。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述样品垫与连结垫对接在一起，所述交联物垫覆盖在所述样品垫与连结垫上。

5.一种制备权利要求1-4任一项所述试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备二氧化硅纳米颗粒：用含有环己烷、正己醇、Triton X-100的油包水微乳体系制备二氧化硅纳米颗粒；

(2)制备荧光二氧化硅纳米颗粒：用3-氨丙基三甲氧基硅烷将所述二氧化硅纳米颗粒表面氨基化，再通过共价交联的方式在其表面交联上稀土荧光螯合物；

(3)制备荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体交联物：用高碘酸钠将标记用抗肌钙蛋白I单克隆抗体氧化，再将所述抗体与表面氨基化的荧光二氧化硅纳米颗粒混匀，发生共价反应而形成荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体交联物；

(4)制备交联物垫：将所述荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体交联物包被于玻璃纤维上制成交联物垫；

(5)制备硝酸纤维素膜：用喷膜仪分别将抗肌钙蛋白I单克隆抗体和羊抗鼠IgG设置且包被于硝酸纤维素膜的检测条带和控制条带上，37℃下充分干燥；

(6)依次将样品垫、交联物垫、连结垫、硝酸纤维素膜和吸水纸相互连接地粘贴至聚氯乙烯底板上。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

在所述步骤(1)中，将比例为3∶1∶1的环己烷、Triton X-100、正己醇混匀，在搅拌下依次加入超纯水、氨水和四乙基原硅酸盐，搅拌24h，用丙酮封闭，采用无水乙醇和超纯水洗涤，即制得二氧化硅纳米颗粒；

在所述步骤(2)中，将步骤(1)所得的二氧化硅纳米颗粒采用3-氨丙基三甲氧基硅烷进行氨基化，用无水乙醇洗涤后再加入BHHCT反应2h，用无水乙醇洗涤后悬浮于50mmol/L、pH值为7.8的Tris，加入EuCl₃使其螯合于颗粒表面的BHHCT上，再经无水乙醇洗涤即获得荧光二氧化硅纳米颗粒；

在所述步骤(3)中，采用高碘酸钠将标记用抗肌钙蛋白I单克隆抗体糖链分子的羟基氧化为醛基，再将该抗体与表面氨基化的所述荧光二氧化硅纳米颗粒混匀，发生共价反应而形成荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体交联物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述步骤(4)和(5)中，将所述荧光二氧化硅纳米颗粒-抗肌钙蛋白I单克隆抗体交联物喷洒于玻璃纤维上后，用冻干机冷冻干燥后作为交联物垫；用Biodot点膜仪将包被用抗肌钙蛋白I单克隆抗体和羊抗鼠IgG喷至硝酸纤维素膜的检测条带和控制条带上，充分干燥。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，进一步将所述聚氯乙烯底板分切成单人份试纸条，将单人份试纸条装入配套的试剂盒条卡内，将试剂盒条卡和干燥剂放入铝箔袋内，封口，最终获得检测肌钙蛋白I的荧光二氧化硅纳米颗粒试剂盒。