[发明专利]rDNA ITS-D3区核苷酸序列在建立药用植物DNA条形码鉴别系统中的应用

权利要求书

1.rDNA ITS-D3区核苷酸序列在建立药用植物DNA条形码鉴别系统中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药用植物的ITS-D3区的核苷酸序列由以下方法得到：

(a)提取药用植物的基因组DNA；

(b)将步骤(a)得到的基因组DNA，先以SEQ ID NO.1所示的序列为上游引物，SEQ IDNO.4所示的序列为下游引物进行PCR扩增，再电泳检测分离出扩增产物；其中所述的PCR扩增程序为：94℃预变性1min后进入循环，94℃变性30S，55℃退火60S，72℃延伸2min，循环36次，72℃延伸7min，12℃保存；

(c)将步骤(b)得到的扩增产物以SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示的序列为引物进行PCR循环测序；其中所述的PCR循环测序的PCR扩增程序为：96℃变性15S，50℃退火15S，60℃延伸4min，25个循环；

(d)将步骤(c)所得到的ABI序列文件用序列拼接软件进行拼接和人工校正，得到ITS-D3区的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的DNA条形码鉴别系统包括DNA条形码数据库、更新DNA条形码数据库的方法和鉴别药用植物的方法，其中，

所述的DNA条形码数据库为所述的药用植物的ITS-D3区核苷酸序列及其对应的药用植物名称的文档；

所述的更新DNA条形码数据库的方法包括检测ITS-D3区核苷酸序列的步骤和将所测得的ITS-D3区核苷酸序列及其药用植物名称添加到所述的DNA条形码数据库内的步骤；

所述的鉴别药用植物的方法包括以下步骤：首先测定待鉴定样品的ITS-D3区的核苷酸序列，再将测定得到的核苷酸序列与DNA条形码数据库中的ITS-D3区的核苷酸序列一起构建聚类树，根据聚类树确定待鉴定样品与DNA条形码数据库中亲缘关系最近的药用植物并比较它们的ITS-D3区核苷酸序列差异，然后以数据库中与待鉴定样品亲缘关系最近的药用植物的物种名称为参考，结合形态特征等信息确定待鉴定样品的物种名称。