[发明专利]半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种以半胱天冬酶-3酶原（Procaspase-3）单克隆抗体、生物素化二抗、显色液以及对照片为主要成分的SP法免疫组化试剂盒及应用。

背景技术

Procaspase-3是Caspase-3的前体酶原，在凋亡信号的传递过程中起着至关重要的作用。Procaspase-3不但接收外源性凋亡通路级联刺激，而且也被内源性凋亡通路所激活。Procaspase-3是整个凋亡通路的最下游分子，所以一旦它发生表达异常或功能变化，整个凋亡信号通路就会被阻断或激活。

目前，已有越来越多的文献报道细胞凋亡与许多疾病密切相关。现已证实神经退行性疾病的发病原因之一就是大脑内的某些核团的神经元发生凋亡，从而导致记忆减退和行为异常。此外，也有研究证实慢性肝炎和慢性肾炎患者的肝脏或肾脏组织中Procaspase-3表达增高，且其表达水平与病程进展密切相关，这说明Procaspase-3也是慢性肝炎和肾炎的生物学标志物。此外，癌症的发病原因也与凋亡密切相关。有研究表明，在结肠癌组织中Procaspase-3表达水平高于周围正常组织的六倍。此外，在神经母细胞瘤、淋巴瘤、白血病、黑色素瘤、肝癌等恶性肿瘤也发现了Procaspase-3过度表达的现象，并发现其表达水平与某些恶性肿瘤患者的预后密切相关，这说明Procaspase-3也可以作为某些恶性肿瘤的生物学标志物和预后标志物。无论是神经退行性疾病、慢性肝炎和肾炎、还是恶性肿瘤都依然是临床上难以攻克的疾病，早诊断早治疗是这些疾病唯一的希望。本试剂盒可检测凋亡执行蛋白Procaspase-3，这会有助于这些疾病的早期诊断。

除了作为上述疾病的诊断生物学标志物外，Procaspase-3 也是肿瘤靶向治疗的理想靶点之一。最近，Putt等人报道他们发现一种Procaspase-3激活剂，即PAC-1，可以使Procaspase-3酶原转化成有活性的Caspase-3，且能迅速导致肿瘤细胞凋亡。荷瘤裸鼠和犬模型实验也证明PAC-1靶向性和高效性，显示了巨大的市场开发潜力。由于Procaspase-3 激活剂药物的适应症为Procaspase-3阳性的恶性肿瘤患者，因此在进行临床研究乃至今后临床应用时，需要确定备选患者肿瘤组织Procaspase-3抗原的表达情况。但是，目前在国内外市场上还未见Procaspase-3蛋白诊断试剂盒。因此，医学上迫切需要开发一种能够快速、便捷且准确地进行Procaspase-3蛋白表达检测的体外诊断用品。

由于目前国内外还未见Procaspase-3蛋白免疫组化诊断试剂盒，己有的检测组织中Procaspase-3蛋白方法操作程序烦琐，非特异性高，不能迅速、准确的判断患者肿瘤组织Procaspase-3 抗原的表达情况。

发明内容

本发明的目的是提供一种Procaspase-3蛋白免疫组织化学诊断试剂盒。

本发明的另一目的是提供一种能够准确测定受试者组织中的Procaspase-3 抗原的表达情况的对照片。

本发明的第三个目的是提供一种检测受试者肿瘤组织中Procaspase-3 抗原表达水平的方法。

在本发明的第一方面，提供了一种Procaspase-3蛋白免疫组化诊断试剂盒。

作为本发明的一个优选例，在所述的Procaspase-3蛋白免疫组化诊断试剂盒中，所述试剂盒中包含免疫组化染色试剂，所述免疫组化染色试剂包含：与组织抗原连接的初始抗体、与初始抗体连接的第二抗体、酶、底物、显色剂、非特异性结合位点的阻断剂及缓冲液。

作为本发明的一个优选例，在Procaspase-3蛋白免疫组化诊断试剂盒中，所述的初始抗体为抗Procaspase-3人源化单克隆抗体、鼠源抗Procaspase-3单克隆抗体、兔源抗Procaspase-3单克隆抗体，或上述初始抗体工作液；所述的第二抗体为生物素标记的抗人IgG、抗鼠IgG或抗兔IgG，或上述第二抗体工作液；所述的非特异性结合位点的阻断剂可选自：动物血清或白蛋白；所述的酶为辣根过氧化物酶；所述的底物为H₂O₂ ；或所述的显色剂选自：DAB-H₂O₂；所述的缓冲液为20倍磷酸盐缓冲液。

在本发明的第二方面，提供了一种检测组织中Procaspase-3蛋白表达的对照片，所述的对照片的一个主表面上具有以下区域：

（1） Procaspase-3 高表达对照区，所述的高表达对照区设有Procaspase-3 高表达的肿瘤组织切片；