[发明专利]半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒和应用

权利要求书

1.半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒是采用免疫组化方法，其中包含免疫组化染色剂。

2.根据权利要求1所述的半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒，其特征在于，所述免疫组化染色剂包含：与组织抗原连接的初始抗体、与初始抗体连接的第二抗体、酶、底物、显色剂、非特异性结合位点的阻断剂及缓冲液。

3.根据权利要求2所述的半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒，其特征在于，所述的初始抗体为抗半胱天冬酶-3酶原人源化单克隆抗体或鼠源抗半胱天冬酶-3酶原单克隆抗体，或上述初始抗体工作液；所述的第二抗体为生物素标记的抗人IgG或抗鼠IgG，或上述第二抗体工作液；所述的非特异性结合位点的阻断剂可选自：动物血清，白蛋白；所述的酶为辣根过氧化物酶：所述的底物为H₂O₂ ；所述的显色剂选自：DAB-H₂O₂或AEC-H₂O₂；所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述的半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含阳性对照片。

5.根据权利要求4所述的半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒，其特征在于，所述的对照片的一个主表面上具有以下区域：

（1）半胱天冬酶-3酶原高表达对照区，所述的高表达对照区设有半胱天冬酶-3酶原高表达的肿瘤组织切片；

（2）半胱天冬酶-3酶原中表达对照区，所述的中表达对照区设有半胱天冬酶-3酶原中度表达的肿瘤组织切片；

（3）半胱天冬酶-3酶原无表达对照区，所述的无表达对照区设有半胱天冬酶-3酶原无表达的肿瘤组织切片；

（4）半胱天冬酶-3酶原检测区，所述的检测区用于放置待检的组织。

6.根据权利要求5所述的半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒，其特征在于，所述半胱天冬酶-3酶原高表达的肿瘤组织切片选自：HL60或 Hep-G2肿瘤组织切片；所述半胱天冬酶-3酶原中表达的肿瘤组织切片选自：DU145或U87肿瘤组织切片；所述半胱天冬酶-3酶原无表达的肿瘤组织切片选自：MCF-7肿瘤组织切片。

7.根据权利要求5-6中任一所述的半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒，其特征在于，检测组织中半胱天冬酶-3酶原表达的对照片中所述的组织切片为石蜡包埋的切片或冰冻组织切片。

8.权利要求1-7中任何一项所述的半胱天冬酶-3酶原蛋白免疫组化诊断试剂盒在药物靶标检测，体外检测组织中半胱天冬酶-3酶原抗原表达水平的评定及恶性肿瘤进展程度、神经退行性病变、肝脏纤维化和肾损伤程度的诊断方面的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，体外检测组织中半胱天冬酶-3酶原抗原表达水平的评定的步骤如下：

（1）组织切片样本染色

a 对于石蜡包埋组织标本可进行系列脱水脱蜡及抗原修复；对于冰冻组织切片需进行系列脱水；

b 3%过氧化氢孵育20分钟，以消除内源性过氧化物酶活性，PBS冲洗，3分钟×3次；

c 滴加封闭用正常牛血清工作液，37度孵育40分钟，倾去，误洗；

d 滴加一抗（抗体稀释液稀释200倍），每片50uL，37℃孵育2h；PBS冲洗，3分钟×3次,

e 滴加二抗工作液，每片50uL，37℃孵育1h；PBS冲洗，3分钟×3次,

f  滴加辣根酶标记链霉素卵白素工作液，每片50uL，37℃孵育20min；PBS冲洗，3分钟×3次；

g  DAB显色：室温，1mlPBS中加色原底物溶液和色原底物缓冲液各1滴，混匀后滴于切片上，每片120ul，作用2min；

h 终止反应，用PBS洗去DAB；

i  镜检，拍照；

 （2）将样品的染色情况与对照片上半胱天冬酶-3酶原高表达、中表达、无表达的组织切片的染色情况进行比对，结果判定如下：

A. 染色情况≥半胱天冬酶-3酶原高表达区，判为强阳性（+++）；

B. 染色情况介于半胱天冬酶-3酶原中表达区和半胱天冬酶-3酶原高表达区之间，判为中强阳性阴性（++）；

C. 染色情况介于半胱天冬酶-3酶原无表达区和半胱天冬酶-3酶原中表达区之间，判为弱阴性（+）；

D. 染色情况≤半胱天冬酶-3酶原无表达区，判为阴性（-）。