[发明专利]菊科类型环肽，以其为活性成分的免疫抑制药物及其制备方法和应用

权利要求书

1.菊科类型环肽化合物，为骨架含有β-苯丙氨酸，并以正常氨基酸肽键直接相连形成的单环均五肽化合物，含有一个L-β-苯丙氨酸、一个L-丝氨酸、一个L-脯氨酸衍生物和两个其他氨基酸衍生物。

2.如权利要求1所述的环肽，为具有下述结构式的化合物Astin C（1）、Astin B（2）、Astin D（3）、Astin H（4）、Tataricin A（5），

                                                

R₁,R₂=芳基或烷基

R₃,R₄,R₅=羟基或卤原子

X,Y=不饱和键或饱和键

。

3.制备权利要求1所述菊科类型环肽化合物的方法，取菊科紫菀属植物的根茎，经干燥、粉碎后，用甲醇回流充分提取；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取；乙酸乙酯部分和正丁醇部分反复用硅胶、Sephadex LH-20、RP-18各种层析柱分离纯化，再结合环肽的TLC检测方法得菊科类型环肽化合物。

4.制备如下结构式所示菊科类型环肽化合物Astin C（1）、Astin B（2）、Astin D（3）、Astin H（4）、Tataricin A（5）的方法，取紫菀根茎，经干燥、粉粹后，用甲醇回流提取3次，时间为每次1-3小时，提取液经减压浓缩得甲醇浸膏；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取，等体积各萃取三次，回收溶剂得到乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分；将乙酸乙酯部分经硅胶柱层析，用100:0，9:1，8:2，7:3，0:100的氯仿/甲醇梯度洗脱，薄层层析，结合环肽TLC检测方法合并其中的9:1和8:1含有环肽的部分；以下的每一步骤都须结合环肽TLC检测方法来进行分离纯化；合并后的浸膏再次经硅胶柱层析，用20:1，10:1，85:15，8:2，0:1的氯仿/甲醇梯度洗脱，根据环肽点的不同合并为八个组分Fr.1 - Fr.8；Fr.2组分经硅胶柱层析，2:1-1:2的石油醚/丙酮梯度洗脱，合并得到六个亚组分Fr.2-1 – Fr.2-6；Fr.2-5再经硅胶柱层析，20:1，15:1，10:1，15:1的氯仿/甲醇梯度洗脱，合并得到五个亚组分Fr.2-5-1 – Fr.2-5-5；组分Fr.2-5-1回收溶剂，蒸干后得到化合物Astin D（3）；Fr.3组分经硅胶柱层析，用1:1-1:2石油醚/丙酮为洗脱剂分离得到两个亚组分Fr.3-1 – Fr.3-2；其中Fr.3-2组分再经硅胶柱层析，用1:3-1:5氯仿/乙酸乙酯为洗脱剂分离得到两个组分Fr.3-2-1和Fr.3-2-2；Fr.3-2-2经Sephadex LH-20层析，1:1的氯仿/甲醇为洗脱剂，得到富集环肽的部分；该部分经重结晶得到化合物Astin C（1）；Fr.4组分经硅胶柱层析，1:1-1:2石油醚/丙酮进行梯度洗脱，合并相似环肽点部分，得到两个亚组分Fr.4-1 – Fr.4-2；亚组分Fr.4-2再经硅胶柱层析，2:1，1:1，1:2石油醚/丙酮进行梯度洗脱，合并得到三个亚组分Fr.4-2-1 – Fr.4-2-3；其中Fr.4-2-2经Sephadex LH-20进行环肽富集，1:1氯仿/甲醇为洗脱剂，再经RP-18柱层析富集环肽，30:70-80:20甲醇/水梯度洗脱；经Sephadex LH-20和RP-18富集环肽后，组分Fr.4-2-2再经硅胶柱层析，20:1，10:1，5:1氯仿/甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，得到四个亚组分Fr.4-2-2-1 – Fr.4-2-2-4；其中Fr.4-2-2-2再经硅胶柱层析20:1，10:1，5:1氯仿/甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，得到五个亚组分Fr.4-2-2-2-1 – Fr.4-2-2-2-5；其中Fr.4-2-2-2-4直接经Sephadex LH-20纯化富集环肽部分，1:1氯仿/甲醇为洗脱剂，合并环肽部分，回收溶剂，蒸干得到化合物Astin H（4）；组分Fr.4-2-2-4经Sephadex LH-20纯化富集环肽部分，1:1氯仿/甲醇为洗脱剂，得到两个组分Fr.4-2-2-4-1 – Fr.4-2-2-4-2；组分Fr.4-2-2-4-1回收溶剂，蒸干后得到化合物Tataricin A（5）；Fr.5组分经硅胶柱层析，1:3-1:9氯仿/乙酸乙酯梯度洗脱，将环肽部分富集，该部分经Sephadex LH-20，1:1氯仿/甲醇为洗脱剂，得到两个组分Fr.5-1 – Fr.5-2；其中组分Fr.5-2经硅胶柱层析，15:1-3:1氯仿/甲醇进行梯度洗脱，得到两个组分Fr.5-2-1 – Fr.5-2-2；组分Fr.5-2-1回收溶剂，蒸干后得到化合物Astin B（2），

R₁,R₂=芳基或烷基

R₃,R₄,R₅=羟基或卤原子

X,Y=不饱和键或饱和键

。