[发明专利]抗体制备方法及所得抗体和抗体库

说明书

技术领域

本发明涉及筛选和/或制备感兴趣蛋白质的特异性抗体的方法。本发明具体涉及一种高通量、低成本和高成功率的方法，其可用于在蛋白质组规模预测感兴趣蛋白质的表位，制备其特异性抗体，以及筛选和检测所产生的抗体。 

背景技术

基因组技术的发展，在基因的层面上为生物功能的研究、疾病的诊断和治疗、以及药物的开发等领域提供了大量的基础信息。但是对于大多数的生物体系来说，单纯的基因信息并不足以阐明其作用机制。此外，如果要利用这些信息以及作用机制来实现应用的目的，如对病理状况进行鉴定和分析、对药物的作用机制及效果进行验证和判断，则需要更进一步地在蛋白质的层面上获取更多的信息，例如分析和研究各种蛋白质的结构、功能、表达、定位、修饰、以及相互作用等性质。 

对蛋白质各种性质的鉴定需要借助很多的技术手段，如质谱、层析、电泳、芯片以及各种标记技术等，这其中的很多技术手段都需要通过抗原抗体的相互作用来实现。此外，抗原抗体相互作用本身也是非常重要的技术手段，其可以广泛地应用于科研、医疗以及药物开发等各个领域，例如治疗性抗体药物的开发等。随着蛋白质研究的深入进展，对各种抗体乃至抗体库的需求也日益增加，例如需要针对某物种蛋白组中所有蛋白制备其特异性抗体库，或者针对某一特定类别的蛋白如激酶、G蛋白受体等制备其特异性抗体等等。但是目前已知的仅仅是针对几千种蛋白的有限抗体，而且其特异性也满足不了很多技术手段的需要。因此，能够针对任何感兴趣蛋白快速、高效且大量地制备高度特异的抗体将具有十分重要的意义。 

目前常用的获取抗体方法包括杂交瘤技术、重组抗体技术、各种分子展示技术，以及将上述这些技术与高通量的方法结合的技术等。 

抗体的制备，通常主要是通过天然或重组蛋白或其片段来免疫动物，使动物体内产生能够特异地识别和结合所述蛋白的抗体。然后根据需要再 使用各种技术手段从动物的细胞中获取抗体，如单克隆抗体或者多克隆抗体等。单克隆抗体的获取通常需要借助杂交瘤技术，该方法在免疫动物后，需要取动物细胞进行融合以获得产生抗体的杂交瘤，再进行克隆建株以产生抗体，随后再对抗体进行纯化和鉴定。根据需要可以再进一步确定其抗原表位。这种产生单克隆抗体的杂交瘤技术最早应用于鼠模型 和Milstein，Nature vol.256，1975)，如今已广泛的应用于各种动物模型，其详细过程可参见各种教科书和操作手册的介绍(如Bazin，“Rat hybridomas andrat monoclonal antibodies”，CRC Press，1990；Goding，“Monoclonal antibodies：principles and practice”，3^rd edition，Academic Press，1996；Shepherd和Dean“Monoclonal antibodies”Oxford University Press，2000等)。此方法虽然目前仍广泛应用于抗体制备，但其也具有很多缺点，如制备周期很长、制备技术非常复杂、不能够完全识别表位、以及成本高昂等缺点，而且这种方法也并不能应用于所有的蛋白质，例如对于很多免疫原性低或者具有毒性的抗原来说，这种方法就不适用(SinclairNR(et al，2004)B cell/antibodytolerance to our own antigens.Front Biosci 9：3019-3028)。