[发明专利]抗体制备方法及所得抗体和抗体库

权利要求书

1.一种制备针对感兴趣的蛋白质的抗体的方法，包括：

(a)预测和/或选择位于感兴趣的蛋白质表面的肽片段；

(b)合成或表达一或多个所述肽片段；

(c)利用步骤(b)的产物免疫动物，任选组合佐剂进行免疫；

(d)用来自步骤(c)的经免疫的动物的淋巴细胞来获得抗体；

(e)用步骤(a)的肽片段和/或天然构象的所述感兴趣的蛋白质来筛选步骤(d)中所获得的抗体，得到针对所述感兴趣的蛋白质的抗体库。

2.权利要求1的方法，其中所述感兴趣的蛋白质是天然蛋白质、和/或其选择性剪接的同种型、和/或其突变型。

3.权利要求2的方法，其中步骤(a)中所述肽片段是感兴趣的蛋白质的线性表面身份肽和/或构象型表面身份结构域。

4.权利要求3的方法，其中所述步骤(a)的肽片段是通过如下方法预测或选择的：

(i)根据感兴趣的蛋白质的序列，通过计算如下参数来确定表面肽，所述参数选自：溶剂可接近性、无序指数、蛋白-蛋白相互作用的结构域预测、或以上任意组合；

(ii)将步骤(a)所确定的表面肽与感兴趣的蛋白质来源物种的蛋白质组进行序列比对，筛选出所述感兴趣的蛋白质的特异性肽片段；

(iii)将步骤(a)所确定的表面肽与其他物种的同源蛋白质进行序列比对，筛选出所述感兴趣的蛋白质的保守序列。

5.权利要求4所述的方法，其中所述身份肽是长度为5-20个氨基酸、高亲水性、高抗原性、非信号肽、非跨膜区以及位于无序区域的肽。

6.权利要求4的方法，其中所述身份结构域是长度为100-500个氨基酸、预期具有3维结构的序列特异性蛋白质片段。

7.权利要求1-6任一项的方法，其针对一个物种所有的蛋白质来产生抗体库。

8.权利要求1-7任一项的方法，其中步骤(e)所产生的抗体库包含针对感兴趣的蛋白质的所有表位的抗体。

9.权利要求1-8任一项的方法，其中步骤(d)通过至少一种选自如下的方法而获得抗体：

(1)将来自步骤(c)经免疫的动物的淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞并表达从而获得抗体；

(2)从来自步骤(c)经免疫的动物的淋巴细胞中分离出抗原特异性B细胞，再利用PCR来克隆和表达抗体基因从而获得抗体；

(3)从来自步骤(c)经免疫的动物的淋巴细胞中分离出mRNA，然后通过噬菌体展示、或者核糖体展示、或者酵母展示、或者细菌展示、或者杆状病毒展示、或者不如细胞展示、或者mRNA展示来获得抗体。

10.权利要求1至9任一项的方法，其中所述步骤(b)的一或多个肽片段以与增强免疫原性和/或增加拷贝数的蛋白质的融合蛋白的形式重组表达。

11.权利要求10的方法，其中所述增强免疫原性和/或增加拷贝数的蛋白质为病毒样颗粒蛋白载体。

12.权利要求11的方法，其中所述增强免疫原性和/或增加拷贝数的蛋白质为乙肝病毒核衣壳(HBC)蛋白。

13.权利要求12的方法，其中所述一或多个肽片段插入到HBC蛋白的环、N端或C端。

14.权利要求13的方法，其中所述一或多个肽片段插入到HBC蛋白的位置位于HBC蛋白的第77和第82位氨基酸残基之间。

15.权利要求12-14任一项的方法，其中通过接头连接的2-10个肽片段插入在HBC蛋白中。

16.权利要求15的方法，其中所述接头是(GGGGS)_n，其中n＝1、2、3或4。

17.权利要求16的方法，其中n＝1或2。

18.权利要求1至9任一项的方法，其中所述步骤(b)表达的一或多个肽片段进一步与免疫增强载体蛋白偶联。

19.权利要求18的方法，其中所述免疫增强载体蛋白为匙孔血蓝蛋白(KLH)。

20.权利要求1至9任一项的方法，其中所述步骤(b)的一或多个肽片段是化学合成的。