[发明专利]一种月橘烯碱的提纯方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然产物分离领域，尤其涉及一种采用高速逆流色谱法提取高含量月橘烯碱的方法。

背景技术：

九里香(Murraya exotica L.)属芸香科九里香属植物，别名千里香、满山香、月橘、过山香、七里香等。九里香是一种中药材，据中药大辞典记载，该植物根部民间曾外用于引产，现代药理研究表明，九里香具有抗生育和终止妊娠、抗菌消炎等作用。

月橘烯碱：

香港中文大学首次从九里香中分离的一种双吲哚生物碱，极性较小，不溶于水，易溶于乙醚，乙腈，甲醇等有机溶剂。关慕贞等药理研究发现，小鼠口服或皮下注射月橘烯碱有明显的抗着床作用，同时月橘烯碱存在明显的雌激素活性，无孕激素或抗孕激素活性。目前市场上几乎没有月橘烯碱纯品或对照品，本发明提供一种高纯度月橘烯碱的提取方法，为月橘烯碱的进一步研究提供对照依据。

现有工艺中从九里香中提取月橘烯碱的方法较少，如谢晶曦等发表的“九里香抗生育活性物质——月橘烯碱的仿生合成研究”，该文献采用化学合成的方法制得月橘烯碱；再如高红等公开的“新型避孕化合物月橘烯碱的提纯”，该文献以全合成的产物为原料进一步分离纯化得到产品，该文献公开的方法是：月橘烯碱的最后一步合成产物经常压硅胶柱层析，石油醚-乙醚系统洗脱后经制备反相高效液相色谱法分离，再经低压硅胶柱层析，最后产品置于乙醚-己烷溶剂系统中重结晶。该方法提纯步骤繁多，纯化过程中损失较大，且制备量小。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种从天然产物中提纯月橘烯碱方法。

本发明之所以采用阳离子树脂富集，是因为月橘烯碱在酸性条件下呈离子状态，可以与阳离子树脂进行离子交换而吸附在阳离子树脂上，达到与杂质有效分离的目的；采用高速逆流色谱法进一步分离纯化，因为该分离方法操作简便，同时也避免了样品的损失，与传统分离手段相比，克服了其操作繁琐，分离周期长的缺点，并具有制备量大，产品纯度高的优点。

本发明是采用以下技术方案来实现的：

一种月橘烯碱的提纯方法，其特征在于包含以下步骤：取九里香药材粉碎，用4～10倍量酸性醇溶液浸泡或回流提取2～4次，合并提取液，浓缩至无醇后上阳离子树脂柱，用2～5BV中性醇溶液洗去杂质，再将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加碱液调节至pH9～10，用1～3倍量有机溶剂回流或超声提取2次，回收有机试剂至干，再采用高速逆流色谱法进行分离纯化，以氯仿-甲醇-甲苯-5％盐酸(3～9∶4～10∶3～6∶1～5)作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将月橘烯碱粗品用下相溶解，进样后45min开始收集流出物，采用UV手段监测收集流出物，干燥即得产品。

所述的酸性醇溶液是指pH2～4的60～90％乙醇或甲醇溶液，酸可选用盐酸、硫酸、磷酸或甲酸中的一种，采用浸泡方式提取时间为8～20h，回流方式提取时间为1.5～4小时。

所述的阳离子树脂选用强酸性阳离子树脂，用量是药材量的0.5～1.2倍量，吸附流速为1.5～3ml/min，吸附完全后用50～70％中性乙醇洗去杂质，洗脱时流速控制在1.5～3BV/h。

所述的碱液选用氨水，有机溶剂选用乙酸乙酯、氯仿或乙醚中一种。

所述的高速逆流色谱法分离，参数设定：色谱仪转速750～1050r/min，流动相流速0.8～3.0ml/min，UV检测波长为280nm。

所述的干燥方法可选用喷雾干燥、冷冻干燥、真空干燥或微波干燥等方式中的一种。

本发明的积极效果是：

1)强酸性阳离子树脂富集：通过离子交换达到有效富集的目的，调碱后采用超声或回流方式使月橘烯碱游离；

2)高速逆流色谱法分离：无需使用载体，减少了操作过程中样品的损失，分离效果好，制备量大。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将九里香药材粉碎，称取1Kg，加入10LpH4(盐酸)的85％乙醇溶液浸泡18h，过滤，再加入5LpH3(盐酸)的80％乙醇溶液浸泡10h，过滤，合并滤液浓缩至无醇，取500g强酸性阳离子树脂装柱，浓缩液过色谱柱，吸附流速为3ml/min，吸附完全后用1L50％中性乙醇洗去杂质，洗脱流速控制为1.5BV/h，再将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至pH10，再加2L乙酸乙酯回流提取2次，回收溶剂得月橘烯碱粗品。