[发明专利]截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及动物医学及生物技术领域，尤其涉及截短的鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白及其制备与应用。

背景技术

鸭瘟（Duck plague,DP）又称为鸭病毒性肠炎(Duck Viral Enteritis,DVE)，是由鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）引起的鸭、鹅及多种雁行目禽类的一种急性、热性、败血性传染病，是危害世界水禽养殖的主要传染病之一。目前用于鸭瘟预防的疫苗有灭活苗和弱毒苗两大类，其中弱毒苗较之灭活苗免疫效力更好，而对DPV特异性抗体水平的检测是评价DPV免疫效果及制定合理的免疫程序的关键。目前，用于检测DPV抗体的主要方法包括中和试验(neutralization test，NT)、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)、琼脂凝胶扩散试验、Dot-ELISA测定法和被动血凝试验。其中经典的方法是血清中和试验，但因其实验周期长，操作繁琐，敏感性差，不适于大批量血清样品检测。EL ISA用于DPV抗体检测具有简便、敏感、特异等优点, 结合半自动化检测设备，适宜于大批鸭群抗体水平的监测和基层单位检疫需要；但是以往建立的ELISA方法使用全病毒作为包被抗原，由于受病毒培养和纯化等方面的技术限制，全病毒抗原纯度有限，稳定性差，难以标准化，从而影响ELISA检测结果的准确性，限制了包被全病毒的ELISA方法（DPV-ELISA）的大规模应用。因而，建立特异敏感的诊断方法对预防控制该疾病显得十分必要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供截短鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白，该蛋白是经切除信号肽与跨膜位点，并保留大部分抗原位点，即gI基因的88bp-813bp区域，在宿主细胞中表达而得，其表达效率高。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

1、截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白，所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列及如SEQ ID No.1所示的DNA序列。

2、根据1所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白，所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白由插入了如SEQ ID No.1所示的DNA序列的重组原核表达载体转化入宿主细胞所得的转化体诱导表达而得。

3、根据2所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白，重组原核表达载体为pET-32a(+)插入了如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列而得。

4、根据2所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白，宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)Plysis。

本发明的目的之二在于提供截短鸭瘟病毒gI蛋白的制备方法，该方法工艺简单、成本低，适合于大规模生产。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

5、1-4任一项所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的制备方法，具体包括以下步骤：

A、截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的基因的获得

以鸭瘟病毒的核酸为模板，前引物如SEQ ID No.3，后引物如SEQ ID No.4所示，通过聚合酶链式反应获得截短的gI核酸序列，如SEQ ID No.1所示；

B、截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的重组原核表达载体的获得：

将步骤A所得如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列插入原核表达载体pET-32a(+), 获得截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的重组原核表达载体, 命名为pET-32a(+)-gI726；

C、截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的获得

将步骤B所得pET-32a(+)-gI726转化入宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)Plysis，得转化体，将所述转化体用异丙基-Β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达，得截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白。

6、根据5所述的截短鸭瘟病毒Ig蛋白抗原的制备方法，其特征在于：将步骤B所得pET-32a(+)-gI726转化入宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)Plysis并用异丙基-Β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达，Ni-NTA Argarose纯化，得截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白。

本发明的目的之三在于提供截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的应用，该应用是基于其具有良好的抗原反应原性而产生的，其特异性好，敏感性高。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

7、1所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白在制备鸭瘟病毒抗原 中的应用。