[发明专利]截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白及其制备方法与应用

权利要求书

1.截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白，其特征在于：所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列及如SEQ ID No.1所示的DNA序列。

2.根据权利要求1所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白，其特征在于：所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白由插入了如SEQ ID No.1所示的DNA序列的重组原核表达载体转化入宿主细胞所得的转化体诱导表达而得。

3.根据权利要求2所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白，其特征在于：重组原核表达载体为pET-32a(+)插入了如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列而得。

4.根据权利要求2所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白，其特征在于：宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)Plysis。

5.权利要求1-4任一项所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

A、截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的基因的获得

以鸭瘟病毒的核酸为模板，前引物如SEQ ID No.3，后引物如SEQ ID No.4所示，通过聚合酶链式反应获得截短的gI核酸序列，如SEQ ID No.1所示；

B、截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的重组原核表达载体的获得：

将步骤A所得如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列插入原核表达载体pET-32a(+), 获得截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的重组原核表达载体, 命名为pET-32a(+)-gI726；

C、截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白的获得

将步骤B所得pET-32a(+)-gI726转化入宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)Plysis，得转化体，将所述转化体用异丙基-Β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达，得截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白。

6.根据权利要求5所述的截短鸭瘟病毒Ig蛋白抗原的制备方法，其特征在于：将步骤B所得pET-32a(+)-gI726转化入宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)Plysis并用异丙基-Β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达，Ni-NTA Argarose纯化，得截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白。

7.权利要求1所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白在制备鸭瘟病毒抗原或疫苗中的应用。

8.权利要求1所述的截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白在制备检测鸭瘟病毒抗体的ELISA试剂盒中的应用。

9.鸭瘟病毒抗体的ELISA检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

a 固相抗原的制备：将所述截短表达鸭瘟病毒重组囊膜gI蛋白包被酶标反应板，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；

b 一抗结合：将待检血清作2倍的稀释，得稀释血清，通过保温反应使所述稀释血清与所述固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；

c 二抗结合：将辣根过氧化酶标记的羊抗鸭IgG酶标二抗作3000倍的稀释，得酶标二抗稀释液，将所述酶标二抗稀释液与所述固相抗原抗体复合物结合，得抗原—抗体—二抗复合物；

d 显色：在步骤c所得抗原—抗体—二抗复合物加入显色液TMB，避光显色10-20分钟，加入终止液终止反应得显色样品液；

e 检测并判定：将步骤d所述显色样品液用酶标仪测OD_450nm值, OD_450nm值在约等于1且P/N比值＞2.0时，判定为阳性。