[发明专利]一种抗菌肽、其制备方法和用途

权利要求书

1.一种抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽为SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽。

3.如权利要求1或2所述的抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽分离自长角血蜱，分子量为5.3kDa，等电点为8.68。

4.一种制备如权利要求1-3中任一项所述抗菌肽的方法，其特征在于，所述方法包括：

1)收集长角血蜱的唾液；

2)将步骤1)中收集到的唾液进行超速离心过滤；以及

3)将步骤2)中得到的滤液组分进行凝胶过滤层析。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：

4)将步骤3)中通过凝胶过滤层析得到的洗脱液通过HPLC反相高效液相色谱进行纯化。

6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述步骤1)包括：

兔血饲喂长角血蜱使之体重达200-300μg，然后将该血蜱清洁干净，使用唾液分泌诱导剂诱导血蜱分泌唾液，当观察到血蜱开始分泌唾液后，将血蜱放在34.5-35.5℃、优选35℃的盒子中2-3小时，之后收集该长角血蜱分泌的唾液并于-70℃储存备用；

优选地，所述唾液分泌诱导剂为毛果芸香碱，诱导剂量为每只长角血蜱0.8-1.1μg、优选1μg的毛果芸香碱，初次给至血蜱后每隔20分钟添加0.5μg毛果芸香碱，直到观察到血蜱分泌少量唾液为止。

7.如权利要求4-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤2)包括：

取200-300μl步骤1)中收集到的长角血蜱唾液，使用截留分子量为10kDa的YM-10滤膜和截留分子量为3kDa的YM-3滤膜于4℃超速离心，得到组分II，即分子量在3-10kDa之间的滤液。

8.如权利要求4-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤3)包括：

将步骤2)中得到的组分II加到Superdex Peptide 10/300凝胶过滤层析柱上，柱子规格：10mm×300mm，并且过滤柱用30％的乙腈甲醇溶液和0.1％甲酸预平衡，然后以5μl/min的流速收集第3个洗脱峰的洗脱液。

9.如权利要求4-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤4)包括：

采用0.3mm×150mm C8磁性柱、ABI 140D泵和785A紫外检测仪，以2或5μl/min的速度灌柱；溶液A为含10％甲醇和0.1％甲酸的水溶液，溶液B组分为30％乙腈甲醇溶液和0.1％甲酸溶液；

色谱柱用前用溶液A平衡，柱子平衡后将步骤3)中得到的第3个峰的洗脱液加到柱子上，然后再以梯度10％-95％加入溶液B，流速控制在5μl/min，持续20min，然后流速调整到2μl/min，然后用馏分收集器每隔1min收集一次洗脱液。

10.如权利要求1-3中任一项所述抗菌肽在制备抗菌药物中的用途。