[发明专利]一种检测脑脊液中14-3-3蛋白的方法

权利要求书

1.具有良好免疫反应性的14-3-3蛋白的制备。其特征在于利用本发明的方法进行14-3-3蛋白编码基因的克隆及表达载体的构建，并纯化出良好免疫原性的14-3-3重组蛋白。

2.特异性抗14-3-3蛋白抗血清的制备。其特征在于利用本发明的方法和权利要求1中制备的重组蛋白免疫动物，制备高特异性、高效价的14-3-3抗体。

3.用于脑脊液中14-3-3蛋白检测方法的步骤。具体步骤如下：送检的各种中枢神经系统疾病患者的脑脊液和怀疑为克雅氏病(CJD)患者的脑脊液样品，进行常规样品处理后，加入等量蛋白上样缓冲液后，100℃变性5分钟，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后，用权利要求2中制备的抗血清作为一抗，用辣根过氧化物酶标记的抗兔免疫球蛋白G(IgG)作为二抗，进行蛋白印迹法(Western blot)检测和显色，结果为阳性的样品即可以判定为脑脊液中14-3-3蛋白含量升高。