[发明专利]一种S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法有效
申请号: | 201110009437.8 | 申请日: | 2011-01-17 |
公开(公告)号: | CN102174622A | 公开(公告)日: | 2011-09-07 |
发明(设计)人: | 姜岷;侯顾伟;马江锋;隋姗姗;奚永兰;陈可泉;韦萍;欧阳平凯 | 申请(专利权)人: | 南京工业大学 |
主分类号: | C12P19/64 | 分类号: | C12P19/64 |
代理公司: | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人: | 肖明芳 |
地址: | 210009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 葡萄 糖苷 半胱氨酸 合成 方法 | ||
1.一种S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法,其特征在于以含有蔗糖和L-半胱氨酸的水溶液为底物,加入蔗糖磷酸化酶,通过蔗糖磷酸化酶的转葡萄糖基反应制备S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸。
2.根据权利要求1所述的S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法,其特征在于所述的蔗糖初始反应浓度为0.1~1.5mol/L;L-半胱氨酸初始反应浓度为0.05~0.2mol/L,蔗糖与L-半胱氨酸的摩尔比为4∶1~4。
3.根据权利要求1所述的S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法,其特征在于所述的蔗糖磷酸化酶按如下步骤制备得到:
(1)以蔗糖为碳源厌氧发酵肠膜明串珠菌产蔗糖磷酸化酶;
(2)利用蛋白质分离纯化系统制备蔗糖磷酸化酶。
4.根据权利要求3所述的S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法,其特征在于所述的肠膜明串珠菌为肠膜明串珠菌Leuconostoc mesenteroides ATCC12291。
5.根据权利要求3所述的S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法,其特征在于所述的蛋白质分离纯化系统为AKTATM explorer 100。
6.根据权利要求1所述的S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法,其特征在于蔗糖磷酸化酶的加入量为20~50U/mL。
7.根据权利要求1~6中任意一项所述的S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法,其特征在于酶促反应温度为30~37℃,反应pH为5.5~8.2,反应时间为8~20小时。
8.根据权利要求7所述的S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法,其特征在于反应pH使用HEPES缓冲体系或者MES缓冲体系调节。
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